血管緊張素-(1-7)對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞E-選擇素表達(dá)的影響及其機制研究.pdf

1、炎癥與凝血反應(yīng)通過多個環(huán)節(jié)相互作用，形成一種網(wǎng)絡(luò)關(guān)系。兩者之間相互促進(jìn)，形成一種自動放大的級聯(lián)效應(yīng)。如不干預(yù)，可能導(dǎo)致彌漫的血管內(nèi)皮損傷，臟器功能障礙，最終可造成死亡。E-選擇素（E-selectin，Es）是參與體內(nèi)早期炎癥反應(yīng)的重要因子，通過介導(dǎo)炎癥起始階段白細(xì)胞滾動和滯留引發(fā)炎癥，而炎癥反應(yīng)又是血栓形成的常見原因。靜息時，內(nèi)皮細(xì)胞上的Es含量甚微；當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到炎性因子，如白介素-1（IL-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）

2、、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、細(xì)菌脂多糖（LPS）等刺激后，Es的表達(dá)大大增加。 腎素--血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin system，RAS）是人體內(nèi)重要的調(diào)節(jié)系統(tǒng)之一，在維持人體正常組織功能的正常進(jìn)行中起重要作用。近來許多研究顯示該系統(tǒng)中的AngⅡ不僅有升高血壓的作用，而且還可影響凝血系統(tǒng)、纖溶系統(tǒng)以及血小板的功能，參與了動脈粥樣硬化、急性心肌梗死等與血栓形成有關(guān)的疾病的發(fā)生發(fā)展。 血管緊張素-（1

3、-7）[Ang-（1-7）]是近來新發(fā)現(xiàn)的該系統(tǒng)另一重要活性產(chǎn)物。不同于AngⅡ的生成方式（由AngⅠ經(jīng)ACE生成），Ang-（1-7）主要是在ACE2作用下生成的一個七氨基酸多肽。Ang-（1-7）在許多方面與AngⅡ有著相拮抗的作用，如舒張血管，降低血壓，抑制細(xì)胞增殖等。因此，現(xiàn)代概念認(rèn)為在正常條件下RAS中存在著ACE-AngⅡ和ACE2-Ang-（1-7）平衡，它們共同調(diào)節(jié)著生理穩(wěn)態(tài)。但Ang-（1-7）是否在血栓形成方面也和A

4、ngⅡ有著相反的作用，能否通過抑制Es的升高進(jìn)而降低血栓疾病的發(fā)生，以及具體機制是什么，至今尚未見報道。 研究目的:①觀察AngⅡ?qū)θ四氺o脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株（HUVECs）Es表達(dá)的影響以及Ang-（1-7）對其的干預(yù)作用；②探討Ang-（1-7）抑制AngⅡ誘導(dǎo)HUVECs Es表達(dá)的作用機制。 方法: HUVECs的培養(yǎng)采用DMEM完全培養(yǎng)基，單核細(xì)胞THP-1培養(yǎng)采用RPMI-1640完全培養(yǎng)基；吉姆薩染色和MTT比

5、色法觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)和活力；采用比色法檢測粘附率；ELISA法檢測Es抗原；RT-PCR的方法檢測Es mRNA；免疫組織化學(xué)染色觀察NF-κB的變化。 結(jié)果:①對照組相比，不同濃度的AngⅡ（10-10～106mol/L）能呈劑量依賴性地促進(jìn)HUVECs與THP-1的粘附率（r=0.972，P<0.05）以及Es抗原（r=0.965，P<0.05）、Es mRNA增加（P<0.05），10-7mol/L達(dá)到最大作用濃度。

6、②單用Ang-（1-7）（10-9～106mol/L）對血管內(nèi)皮細(xì)胞與單核細(xì)胞的粘附率沒有影響（P>0.05）；但在給予AngⅡ之前30 min用Ang-（1-7）（10-9mol/L～10-6mol/L）預(yù)處理HUVECs后，AngⅡ（10-7mol/L）刺激HUVECs表達(dá)Es的作用（r=-0.943，P<0.05）以及與單核細(xì)胞的粘附明顯受抑制，并存在顯著的量效關(guān)系（r=-0.925，P<0.05），在10-6mol/L時其抑制作

7、用最強。③一氧化氮合酶（NOS）抑制劑L-NAME可明顯地阻抑Ang-（1-7）拮抗AngⅡ促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞粘附率升高和Es、Es mRNA增加的作用（P<0.05）。④免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)AngⅡ作用45 min可引起內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB從胞漿移入核內(nèi)；Ang-（1-7）預(yù)處理15 min可抑制AngⅡ引起的內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)NF-κB的轉(zhuǎn)位。 結(jié)論:①AngⅡ能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)Es，Ang-（1-7）具有在mRNA水平抑制AngⅡ刺激