血管緊張素Ⅱ?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞自噬的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、研究背景:血管內(nèi)皮功能障礙與高血壓病的發(fā)生密切相關(guān),血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)是造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的一個重要因素,自噬是一種細(xì)胞應(yīng)對損傷的保護(hù)性反應(yīng),而迄今對高血壓病理過程中血管內(nèi)皮細(xì)胞中自噬的作用仍知之甚少。在AngⅡ引發(fā)損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞中,我們推測自噬可能是防止血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的一種潛在機(jī)制。因此,本研究通過觀察AngⅡ?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞自噬的影響,并初步探討AngⅡ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的可能機(jī)制,為高血壓病的有效防治提供新思路。

2、r>　　研究目的:研究血管緊張素Ⅱ?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞自噬的影響,并初步探討血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生自噬的可能機(jī)制。
　　研究方法:以EA.hy926血管內(nèi)皮細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)研究對象,CCK8法檢測10-8、10-7、10-6mol/L的AngⅡ作用24h后對EA細(xì)胞生長的影響,利用熒光酶標(biāo)儀檢測AngⅡ(10-7mol/L)、AngⅡ聯(lián)合N-乙酰半胱氨酸(NAC,50μmol/L)作用24h后細(xì)胞中ROS生成量;然后固定濃度為10

3、-7mol/L的AngⅡ處理不同時間(0h、6h、12h、24h、36h)后或不同濃度(10-8、10-7、10-6mol/L)的AngⅡ處理24h,通過Westernblotting分析LC3-Ⅱ蛋白變化以及吖啶橙(AO)染色后通過熒光顯微鏡下觀察胞漿中自噬體形成的情況來判斷血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的發(fā)生情況;AngⅡ(10-7mol/L)聯(lián)合自噬的抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA,2mmol/L)、N-乙酰半胱氨酸(NAC,50μmol/L)

4、或纈沙坦(Valsartan,20μmol/L)處理24h后使用相同方法檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的發(fā)生情況。
　　研究結(jié)果:EA.hy926血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)過AngⅡ刺激后胞內(nèi)ROS生成量顯著增加(P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05),自噬體的形成明顯增加;3-MA、NAC或Valsartan可以明顯抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞中AngⅡ所誘導(dǎo)的LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)(P<0.05)及自噬體的形成。
　　研究結(jié)論:AngⅡ