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文檔簡介
1、[目的]觀察低剪切應(yīng)力對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)自噬的影響并探討其機制。
[方法](1) apoE-/-小鼠喂飼高脂飲食,分別于0、4、8和12周處死,取主動脈竇部做冰凍切片,主動脈提蛋白。HE和油紅O染色法觀察動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,As)斑塊病變;免疫組織化學(xué)法和Western blot檢測BECLIN1、LC3和P62以及TET2的蛋白表達;免疫熒光法觀察5-mC和5-hmC的含量。(2)將
2、HUVECs置于體外灌流系統(tǒng),分別以低剪切應(yīng)力(5 dyne/cm2)和正常剪切應(yīng)力(15 dyne/cm2)處理1h,Western blot檢測BECLIN1、LC3和P62以及TET2的蛋白表達。再以巴伐洛霉素孵育2h,觀察LC3II/LC3I的比值。(3)低表達和高表達TET2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HUVECs,Western blot檢測BECLIN1、LC3和P62的蛋白表達。再以不同剪切應(yīng)力處理1h,Western blot檢測BECL
3、IN1、LC3、P62和ET-1及eNOS的蛋白表達。
[結(jié)果]隨著高脂飲食時間的延長,As病變程度逐漸加重。As病變進程中BECLIN1、LC3和P62的蛋白含量顯著增加;TET2的蛋白表達明顯降低;5-mC的含量顯著增加,且其增加幅度顯著高于5-hmC。與正常剪切應(yīng)力組相比,低剪切應(yīng)力組BECLIN1和LC3II/LC3I的蛋白表達降低;自噬障礙標志物P62的蛋白表達增加;TET2的蛋白表達降低。巴伐洛霉素孵育2h后,低剪
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