脂多糖對大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2 (angiotensin converting enzyme-2，ACE2)在大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞 (rat pulmonary microvascular endothelial cell，RPMVEC)上的表達(dá)，觀察脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)對RPMVEC的損傷作用及ACE2表達(dá)的影響。 方法：采用RT-PCR、Westem blot和免疫組化方法，檢測體外培養(yǎng)的RP

2、MVEC是否表達(dá) ACE2；引入內(nèi)參半定量分析10μg/ml的LPS孵育RPMVEC后不同時相點(diǎn)ACE2表達(dá)的變化；用MTT比色法測定不同劑量LPS(0.1μg/ml-100μg/ml) 作用后RPMVEC在540nm處的吸光度，以反映細(xì)胞存活率和代謝活性的變化。 結(jié)果：1．體外成功分離培養(yǎng)出RPMVEC，并經(jīng)形態(tài)學(xué)及FITC-BSI結(jié)合實(shí)驗(yàn)證實(shí)。2．RT-PCR法從細(xì)胞總RNA中擴(kuò)增出ACE2的特異性條帶，Western bl

3、ot法在細(xì)胞蛋白提取液中檢測出ACE2的蛋白印跡條帶，免疫組化實(shí)驗(yàn)表明ACE2免疫組化反應(yīng)產(chǎn)物主要位于RPMVEC的胞膜和胞漿。3．以 10μg/ml的LPS處理RPMVEC后，用RT-PCR及Western blot法檢測ACE2的變化，在3h、12h、24h時相點(diǎn)，ACE2 mRNA和蛋白的表達(dá)量均明顯低于對照組。4．MTT比色實(shí)驗(yàn)表明，0.1μg/ml-100μg/ml濃度的LPS作用RPMVEC后，細(xì)胞存活率和代謝活性顯著降低，