大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞衰老機制的研究.pdf

1、目的:在成功分離培養(yǎng)大鼠PMVECs的基礎(chǔ)上,建立穩(wěn)定可靠的D-半乳糖(D-galactose, D-gal)誘導的大鼠PMVECs衰老模型;從細胞周期,細胞生長存活和細胞凋亡及其信號傳導途徑調(diào)控等方面探討PMVECs衰老的細胞分子機制.結(jié)論:1.我們聯(lián)合應用胰蛋白酶和膠原酶消化法分離大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞,亞克隆法進行純化,并對大鼠PMVECs進行了系統(tǒng)的鑒定,證實為內(nèi)皮細胞來源,細胞純度達98.99﹪.為老年肺功能不全研究提供了理想的

2、細胞來源.目前在國內(nèi)未見相關(guān)報道該方法不需特殊的設(shè)備,但需一定的操作技巧,一般實驗室均可開展.2.首次建立了D-gal誘導的大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞衰老模型,為研究大鼠PMVECs衰老及老年肺功能不全的機制提供了穩(wěn)定可靠的細胞衰老模型.3.首次對D-gal誘導的大鼠PMVECs的衰老機制從細胞周期,細胞生長存活和細胞凋亡以及信號傳導途徑進行了較系統(tǒng)的研究,發(fā)現(xiàn):①D-gal能調(diào)控細胞周期相關(guān)蛋白(cyclinA、D1、E,Cdk2,p16、

3、p21、p53)來抑制細胞增殖,促進細胞衰老.ROS很可能是D-gal促衰老的主要原因.②在D-gal誘導的衰老PMVECs模型,從多方面觀察了細胞凋亡現(xiàn)象,發(fā)現(xiàn)衰老的細胞容易凋亡.通過分析凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2表達減少,Bax表達增加,caspase-3激活和線粒體降低,證實了細胞凋亡參與了D-gal促進細胞衰老的機制,并與線粒體途徑有關(guān).③D-gal誘導大鼠PMVECs衰老過程中可同時啟動存活與凋亡兩條途徑,即隨衰老的進程,與細胞存