低溫低氧復(fù)合暴露對大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用.pdf

1、目的：研究低溫、低氧單因素及低溫低氧復(fù)合因素對大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用，闡明低溫低氧復(fù)合暴露損傷與單因素暴露損傷的區(qū)別及復(fù)合暴露的主要影響因素，為進(jìn)一步認(rèn)識高原肺水腫的發(fā)病機(jī)理提供理論依據(jù)。
　　方法：⑴動物暴露模型:24只雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量180～200g，隨機(jī)分為4組:正常對照組(n=6):25℃室溫、常氧含量24h;低溫組(n=6):5℃低溫艙中常氧含量暴露24h低氧組(n=6):25℃室溫、低氧裝置中，設(shè)置

2、氧含量為10％，低氧暴露24h;低溫低氧組(n=6):5℃低溫艙中放置低氧裝置，氧含量為10％，低溫低氧暴露24h。檢測肺組織濕/干比值，病理損傷評分，測定血清中NOS、ET-1的含量，RT-PCR法檢測VEGF、caspase-12的mRNA表達(dá)情況。⑵細(xì)胞暴露模型:采用綜合酶消化法培養(yǎng)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞。分別在常溫(37℃)、低溫(28℃)、低氧(3％O2)、低溫低氧(28℃、3％O2)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。MTT法檢測細(xì)胞存活率，

3、試劑盒檢測LDH活力、SOD活力以及MDA含量、硝酸還原酶法檢測一氧化氮(NO)的釋放、RT-PCR法檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、內(nèi)皮素-1（ET-1）、細(xì)胞間粘附因子-1（ICAM-1）、IL-13、IL-6、TNF-α、caspase-12的基因表達(dá)水平，Hoechst33258和TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡。用析因分析的方法，闡明復(fù)合損傷與單因素?fù)p傷的區(qū)別，有無交互作用。
　　結(jié)果：①動物暴露模型:低溫、低氧單因素和低溫低

4、氧復(fù)合因素均使肺組織的含水量增加，肺組織出現(xiàn)實(shí)質(zhì)性損傷，血清中NOS含量減少而ET-1含量增加， VEGF、caspase-12的mRNA表達(dá)水平上調(diào)。低溫和低氧兩因素在以上對肺組織的損傷及功能改變方面存在正交互作用。②細(xì)胞暴露模型:原代培養(yǎng)的大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞呈典型的鵝卵石樣排列，經(jīng)CD31免疫熒光染色、Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫熒光染色、植物凝集素結(jié)合試驗(yàn)鑒定為微血管內(nèi)皮細(xì)胞。與對照組相比，低溫組、低氧組、低溫低氧組PMVECs的細(xì)胞膜通

5、透性增加（LDH活力增加、VEGF的mRNA表達(dá)上調(diào)）、炎性因子分泌增加（ICAM-1/IL-1β/IL-6/TNF-α的mRNA表達(dá)增加）、血管活性物質(zhì)分泌失衡（NO釋放減少、ET-1的mRNA表達(dá)上調(diào)）、細(xì)胞凋亡增加并且caspase-12的mRNA表達(dá)上調(diào)，而在氧化應(yīng)激損傷方面，SOD的活力則表現(xiàn)為低溫組、低溫低氧組上升，低氧組下降，MDA則只表現(xiàn)為低氧組含量上升;低溫和低氧兩個因素在細(xì)胞存活率、SOD活力、MDA含量、LDH水平