VEGF對低糖性腦微血管內皮細胞損傷的作用研究.pdf

1、低血糖是糖尿病患者采用胰島素強化治療時常見而嚴重的并發(fā)癥。臨床研究表明，低血糖誘發(fā)的腦水腫是低血糖性腦損傷的始動過程。腦微血管內皮細胞是血腦屏障重要組成成分，位于相鄰內皮細胞間的緊密連接通過限制小分子物質通過進而維持腦組織內環(huán)境的穩(wěn)定。但是，低血糖是否通過破壞緊密連接來影響腦微血管內皮細胞功能引起腦水腫的發(fā)生迄今還沒有被研究。血管內皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF），作為調節(jié)血管

2、功能的一個潛在因子，在腦缺血中具有保護作用已經(jīng)被證實，并且還能促進神經(jīng)元的存活及突觸的生長。這些報道促使我們研究VEGF對低血糖性腦內皮細胞功能是否具有保護作用。
　　我們采用永生化的小鼠腦微血管內皮細胞作為研究對象，體外模擬血腦屏障。首先，研究低糖條件對腦微血管內皮細胞的影響。通過采用熒光素鈉（Na-F）檢測暴露于低糖條件的跨內皮細胞的通透性；Western blot和細胞免疫熒光（IF）檢測緊密連接相關蛋白claudin-5，

3、ZO-1和occludin的表達變化和分布改變；乳酸脫氫酶實驗（LDH實驗）檢測低糖對內皮細胞的毒性作用。結果顯示，與正常葡萄糖組相比，低糖條件組（0、0.5、1 mM）的跨內皮細胞通透性均明顯升高，同時，緊密連接蛋白claudin-5的表達也相應下降。當較長時間（24 h）較低糖濃度（0、0.5 mM）時，腦內皮細胞毒性增加。
　　進而，我們采用ELISA檢測低糖條件下24 h后培養(yǎng)基中的VEGF的分泌量，發(fā)現(xiàn)低糖條件組中分泌的

4、VEGF含量比正常葡萄糖條件組中高。最后，通過外加VEGF研究低糖條件下VEGF對腦內皮細胞是否有保護作用，我們檢測了低糖和VEGF共存條件下跨內皮細胞通透性、緊密連接相關蛋白以及細胞毒性的變化。另外，我們還檢測了轉運葡萄糖的主要蛋白Glut-1和反映細胞凋亡程度的主要指標Bcl-2的表達變化。實驗結果顯示，與低糖組相比，低糖和VEGF共存條件下跨內皮細胞通透性降低、claudin-5表達相應增加以及內皮細胞的毒性顯著下降。另外，Glu