有機磷對血管內(nèi)皮細胞的損傷作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討有機磷對大鼠血管內(nèi)皮細胞的損傷作用，初步觀察卡托普利對有機磷血管內(nèi)皮細胞損傷作用的保護作用以及作用機制。
　　方法：
　　一、離體血管環(huán)實驗。采用文獻上的方法制備大鼠胸主動脈的血管環(huán)，將所制得的血管環(huán)根據(jù)實驗的需要分成不同的組別：不同濃度敵百蟲組（3.63×10－4~36.3μmol/L）、敵百蟲（3.63μmol/L）+過氧化氫酶組、敵百蟲（3.63μmol/L）+左旋精氨酸組、敵百蟲（3.63μmol/L）+阿

2、托品組。孵育0.5h，分別檢測乙酰膽堿誘導的內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)以及硝普鈉誘導的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)以及血管組織的NO、MDA、SOD等生化指標的變化。為了研究卡托普利對有機磷引起的毒性作用的保護作用，將血管環(huán)分別與敵百蟲（3.63μmol/L）、卡托普利（10μmol/L）、卡托普利（0.1、1、10μmol/L）+敵百蟲（3.63μmol/L）、敵百蟲（3.63μmol/L）+超氧化物歧化酶、敵百蟲（3.63μmol/L）+過氧化氫酶

3、、敵百蟲（3.63μmol/L）+依那普利拉、敵百蟲（3.63μmol/L）+卡托普利（10μmol/L）+巰基蛋白酶抑制劑共孵育0.5h，分別檢測乙酰膽堿誘導的內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)以及硝普鈉誘導的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)以及血管組織的NO、MDA、SOD等生化指標的變化。
　　二、體外培養(yǎng)的細胞實驗。體外培養(yǎng)HVUEVC-304細胞，為了研究有機磷對血管內(nèi)皮細胞的損傷作用機制，將培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞分成不同組別：不同濃度敵百蟲（3.

4、63×10－4~36.3μmol/L）組、組胺組、敵百蟲（3.63μmol/L）+過氧化氫酶組，共孵育0.5h后，用白蛋白標記法檢測培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞的單層通透性，用噻唑藍比色法檢測內(nèi)皮細胞活性，用試劑盒測定細胞培養(yǎng)液中NO、MDA、SOD等生化指標的變化。為了研究卡托普利對有機磷引起的毒性作用的保護作用，HVUEVC-304分別與敵百蟲（3.63μmol/L）、卡托普利（10μmol/L）、卡托普利（0.1、1、10μmol/L）

5、+敵百蟲（3.63μmol/L）、組胺、敵百蟲（3.63μmol/L）+超氧化物歧化酶、敵百蟲（3.63μmol/L）+過氧化氫酶、敵百蟲（3.63μmol/L）+依那普利拉、敵百蟲（3.63μmol/L）+卡托普利（10μmol/L）+巰基蛋白酶抑制劑（PHMB）共孵育0.5h，分別檢測HVUEVC-304人臍靜脈內(nèi)皮細胞的單層通透性、內(nèi)皮細胞活性以及細胞培養(yǎng)液中NO、MDA、SOD等生化指標的變化。
　　結(jié)果：敵百蟲（3.63

6、×10－2~36.3μmol/L）與血管環(huán)共孵育0.5h，敵百蟲能夠顯著性抑制ACh誘導的EDR反應(yīng)，且抑制效應(yīng)呈現(xiàn)出劑量依賴性；敵百蟲不能夠抑制SNP引起的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)。敵百蟲會導致血管組織中NO含量下降、MDA含量上升以及SOD活性下降。卡托普利（0.1~10μmol/L）能夠?qū)嘲傧x引起的EDR反應(yīng)產(chǎn)生保護作用，且表現(xiàn)出濃度依賴性，而對SNP誘導的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)沒有影響。卡托普利同時能夠?qū)嘲傧x引起的NO含量下降、M

7、DA含量上升以及 SOD活性下降產(chǎn)生保護作用。敵百蟲（3.63×10－2~36.3μmol/L）與HVUEVC-304細胞共孵育0.5h，顯著性增加了單層內(nèi)皮細胞的通透性，降低了內(nèi)皮細胞活性，細胞培養(yǎng)液中NO含量下降、MDA含量上升以及 SOD活性下降。卡托普利（0.1~10μmol/L）能夠減輕敵百蟲引起的單層內(nèi)皮細胞通透性增高，內(nèi)皮細胞活性降低，細胞培養(yǎng)液中NO含量下降、MDA含量上升以及SOD活性下降，且該作用呈現(xiàn)劑量依賴性。超氧