燈盞花素對血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察燈盞花素對H2O2致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)損傷的保護(hù)作用，并探討其可能的作用機(jī)制；分離獲得大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Brain microvascular endothelial cells，BMECs)并建立氧糖剝奪(Oxygen-glucose deprivation，OGD)模型，探討燈盞花素對大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧糖剝奪損傷后是否存在保

2、護(hù)作用以及作用機(jī)制研究。
　　方法：
　　第一部分、體外培養(yǎng)穩(wěn)定傳代的HUVECs細(xì)胞，以H2O2（500μmol/L）損傷HUVECs3h建立損傷模型，繼而采取20、100、200、400mg/L濃度的燈盞花素進(jìn)行干預(yù)，觀察燈盞花素對H2O2損傷的HUVECs細(xì)胞保護(hù)作用。MTT法檢測燈盞花素藥物毒副作用、H2O2損傷劑量關(guān)系以及細(xì)胞活性，試劑盒測定細(xì)胞上清液中一氧化氮（NO)含量、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶（GST)活性，細(xì)胞中

3、丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性。
　　第二部分、采用過篩法以及酶消化法分離獲得原代大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)行相關(guān)形態(tài)學(xué)以及選用Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化鑒定，采用缺氧小室和無糖DMEM-F12培養(yǎng)基共培養(yǎng)6h建立OGD損傷模型。
　　第三部分、MTT法明確燈盞花素是否存在細(xì)胞毒副作用及燈盞花素對OGD損傷后對BMECs細(xì)胞的保護(hù)作用，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況，實時定量PCR檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Bax、Bcl

4、-2表達(dá)情況，ELISA法測定BMECs培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性；ELISA法測定BMECs細(xì)胞中內(nèi)皮素1（ET-1）、組織型纖溶酶原激活劑（t-PA）、白介素1β（IL-1β）、纖溶酶原激活物抑制因子1（PAI-1）、前列環(huán)素（PGI2）、細(xì)胞干擾素β（INF-β）活性。試劑盒檢測BMECs培養(yǎng)上清中過氧化氫酶（CAT）、一氧化氮合酶（NOS）、黃嘌呤氧化酶（XO

5、D）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫酶（LDH）含量變化。
　　結(jié)果：
　　1.燈盞花素對HUVECs毒副作用較小，不同濃度的燈盞花素可顯著對抗H2O2造成的HUVECs損傷，降低MDA含量，增強(qiáng)SOD活性，促進(jìn)NO釋放，升高GST活性。
　　2.細(xì)胞形態(tài)學(xué)及Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化鑒定顯示：成功的培養(yǎng)出了大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞。
　　3.OGD對細(xì)胞活性有明顯的抑制作用，且隨著OGD時間的增加，細(xì)胞抑制率逐漸增

6、加，當(dāng)OGD6h后BMECs抑制率達(dá)到50％左右，為合理的造模時間。
　　4.燈盞花素對BMECs毒副作用較小，與模型組相比不同濃度的燈盞花素均可不同程度的保護(hù)損傷的BMECs并有效抑制細(xì)胞凋亡，燈盞花素可上調(diào)Bcl-2降低Bax的表達(dá)，降低ET-1升高PGI2分泌，減少TNF-α、IL-6、IL-1β、INF-β、LDH釋放，降低PAI-1、NOS、eNOS活性，增加SOD、XOD、t-PA活性。
　　結(jié)論：
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