對(duì)氧磷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用與卡托普利的保護(hù)作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的：探討對(duì)氧磷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用與卡托普利的保護(hù)作用及機(jī)制。 方法： (1)離體血管環(huán)實(shí)驗(yàn)，按文獻(xiàn)方法制備大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)。為探討對(duì)氧磷(paraoxon，PO)對(duì)血管內(nèi)皮功能的損傷作用，將血管環(huán)分別與不同濃度對(duì)氧磷(0.0363～36.3μM)、對(duì)氧磷(3.63μM)+過(guò)氧化氫酶(catalase，CAT)、對(duì)氧磷(3.63μM)+左旋精氨酸(L-arginine，L-Arg)、對(duì)氧磷(3.63μM)+阿

2、托品(atropine，ATP)共同孵育30min后，檢測(cè)乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張(endothelium-dependent relaxation，EDR)反應(yīng)和硝普鈉(sodium nitroprusside，SNP)誘導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)以及血管組織的相關(guān)生化參數(shù)。為探討卡托普利(Captopril，Cap)對(duì)對(duì)氧磷所致血管內(nèi)皮功能損傷的保護(hù)作用，血管環(huán)分別與對(duì)氧磷(3.63μM)、卡

3、托普利(10μtM)、卡托普利(0.1、1、10μM)+對(duì)氧磷(3.63μM)、對(duì)氧磷(3.63μM)+超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、對(duì)氧磷(3.63μM)+過(guò)氧化氫酶、對(duì)氧磷(3.63μM)+依那普利拉(enalaprilat，Ena)、對(duì)氧磷(3.63μM)+卡托普利(10μM)+巰基蛋白抑制劑(cystatin，PHMB)共同孵30min后，檢測(cè)乙酰膽堿誘導(dǎo)的EDR反應(yīng)和硝普鈉誘導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴

4、性舒張反應(yīng)以及血管組織的相關(guān)生化參數(shù)。 (2)體外培養(yǎng)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)，檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞單層通透性及內(nèi)皮細(xì)胞活性。為探對(duì)氧磷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用機(jī)制，將HUVEC分別與不同濃度對(duì)氧磷(0.0363～36.3μM)、組胺(histamine，HA)、對(duì)氧磷(3.63μM)+過(guò)氧化氫酶(catalase，CAT)共同孵育30

5、min后，檢測(cè)HUVEC的單層通透性、內(nèi)皮細(xì)胞的活性以及細(xì)胞培養(yǎng)液中的生化指標(biāo)，并且對(duì)HUVEC進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀查。為探討卡托普利對(duì)對(duì)氧磷所致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用機(jī)制，將HUVEC分別與對(duì)氧磷(3.63lμM)、卡托普利(10μM)、卡托普利(0.1、1、10μM)+對(duì)氧磷(3.63μM)、組胺、對(duì)氧磷(3.63μM)+超氧化物歧化酶、對(duì)氧磷(3.63μM)+過(guò)氧化氫酶、對(duì)氧磷(3.63μM)+依那普利拉、對(duì)氧磷(3.63μM)+卡托

6、普利(10μM)+巰基蛋白抑制劑共同孵育30min后，檢測(cè)HUVEC的單層通透性、內(nèi)皮細(xì)胞的活性以及細(xì)胞培養(yǎng)液中的生化參數(shù)，并且對(duì)HUVEC進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀查。 結(jié)果：對(duì)氧磷(0.0363～36.3μM)與血管環(huán)共孵30 min，濃度和時(shí)間依賴性地顯著抑制了ACh誘導(dǎo)的EDR反應(yīng)，對(duì)SNP誘導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)沒(méi)有影響。對(duì)氧磷引起血管組織一氧化氮(Nitriteoxide，NO)含量及SOD活性下降、丙二醛(malondiald

7、ehyde，MDA)含量上升。卡托普利(0.1～10μM)濃度依賴性地減輕對(duì)氧磷(3.63μM)對(duì)EDR反應(yīng)的抑制作用，以卡托普利(10μM)作用最為明顯，但對(duì)SNP誘導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)沒(méi)有影響。對(duì)對(duì)氧磷所致的血管組織NO含量及SOD活性的降低、MDA含量升高也有顯著保護(hù)作用。對(duì)氧磷(0.0363～36.3μM)與HUVEC共孵30min，濃度和時(shí)間依賴性地顯著增加了單層內(nèi)皮細(xì)胞的通透性、內(nèi)皮細(xì)胞活力下降，細(xì)胞形態(tài)呈萎縮狀改變，胞

8、核深染，細(xì)胞間隙變寬，細(xì)胞培養(yǎng)液中NO含量及SOD活性下降、MDA含量上升?？ㄍ衅绽?0.1～10μM)濃度依賴性地減輕了對(duì)氧磷(3.63μM)所致的內(nèi)皮細(xì)胞損傷，以卡托普利(10μM)作用最明顯，對(duì)對(duì)氧磷(3.63μM)所致的內(nèi)皮細(xì)胞單層通透性的增加以及內(nèi)皮細(xì)胞活力的下降，細(xì)胞培養(yǎng)液中NO含量及SOD活性減少、MDA含量升高有顯著拮抗作用。超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶具有與卡托普利相似的抗對(duì)氧磷損傷作用，但非巰基類血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑