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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
觀察一氧化氮對(duì)不同糖濃度下培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響，探討一氧化氮對(duì)糖尿病血管病變的影響和可能機(jī)制。
方法:
根據(jù)培養(yǎng)液中葡萄糖濃度不同分為四組：正糖11.1mmol／L組；中糖16.7mmol／L組；高糖22.2mmol/L組和極高糖33.3mmol／L組。人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)在上述四組
2、培養(yǎng)液中培養(yǎng)48小時(shí)，然后分別在各組中加入（干預(yù)組）或不加入（未干預(yù)組）一氧化氮供體---硝普鈉(Sodium Nitroprusside，SNP)，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，應(yīng)用Annexin V／PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞硫氧還蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin-interacting Protein，Txnip)mRNA的表達(dá)。
結(jié)果:
1.Annexin V／PI雙染
3、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率為：（1）未干預(yù)組：測(cè)得細(xì)胞凋亡率分別為：
中糖組較正糖組增加29.76％((16.57±1.91)％vs(12.77±1.54)％)(p<0.05)。
高糖組較正糖組增加56.38％((19.97±1.81)％vs(12.77±1.54)％)(p<0.05)。
極高糖組較正糖組增加94.75％((24.87±1.75)％vs(12.77±1.54)％)(p<0.05)。
4、
且極高糖組凋亡率高于中糖組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；高糖組與中糖組，極高糖組與高糖組比較，其凋亡率增加，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>O.05)（2）干預(yù)組：測(cè)得干預(yù)組細(xì)胞凋亡率分別為：
正糖組:干預(yù)組較未干預(yù)組下降55.13％((5.73±1.22)％vs(12.77±1.54)％)(p<0.05)。
中糖組：干預(yù)組較未干預(yù)組下降38.26％((10.23±1.48)％vs(16.57
5、±1.91)％)(p<0.05)。
高糖組：干預(yù)組較未干預(yù)組下降32.55％((13.47±1.78)％vs(19.97±1.81)％)(p<0.05)。
極高糖組：干預(yù)組較未干預(yù)組下降52.15％((11.90±1.35)％vs(24.87±1.75)％)(p<0.05)。
在各組糖濃度中干預(yù)組細(xì)胞凋亡率均低于未干預(yù)組(p<0.05)。
2.RT-PCR檢測(cè)Txnip mRNA的
6、表達(dá)量為：（1）未干預(yù)組：測(cè)得細(xì)胞Txnip mRNA的表達(dá)分別為：
中糖組較正糖組增加25.00％(0.85±0.006vs0.68±0.009)(p<0.05)。
高糖組較正糖組增加30.88％(0.89±0.005vs0.68±0.009)(p<0.05)。
極高糖組較正糖組增加35.29％(0.92±0.002vs0.68±0.009)(p<0.05)。
且極高糖組Txni
7、p mRNA表達(dá)量高于中糖組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；高糖組與中糖組，極高糖組與高糖組比較，其Txnip mRNA表達(dá)量增加，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>O.05)。
（2）干預(yù)組：測(cè)得干預(yù)組細(xì)胞Txnip mRNA的表達(dá)分別為：
正糖組：干預(yù)組較未干預(yù)組下降39.71％(0.41±0.013vs0.68±0.009)(p<0.05)。
中糖組：干預(yù)組較未干預(yù)組下降16.47％(0.71
8、±0.008vs0.85±0.006)(p<0.05)。
高糖組：干預(yù)組較未干預(yù)組下降12.36％(0.78±0.005vs0.89±0.005)(p<0.05)。
極高糖組：干預(yù)組較未干預(yù)組下降10.87％(0.82±0.001vs0.92±0.002)(p<0.05)。
在各組糖濃度中干預(yù)組細(xì)胞Txnip mRNA表達(dá)量均低于未干預(yù)組(p<0.05)。
結(jié)論:
隨
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