HO-1保護(hù)人血管內(nèi)皮細(xì)胞抗凋亡作用的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)的目的是研究HO-1在保護(hù)細(xì)胞凋亡中的作用，探討其產(chǎn)生保護(hù)作用的機(jī)理。實(shí)驗(yàn)中將克隆了HO-1基因的質(zhì)粒pcDNA3HO-1用DOTAP包裹轉(zhuǎn)入人血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）中進(jìn)行表達(dá)。質(zhì)粒表達(dá)一段時(shí)間后采用TNF－α誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，以流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率。在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞后，用細(xì)胞裂解液破碎細(xì)胞， SDS-PAGE鑒定表達(dá)量。通過(guò)設(shè)置質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的時(shí)間梯度和濃度梯度，找出質(zhì)粒表達(dá)的最佳條件。再通過(guò)在各個(gè)條件下細(xì)胞凋亡率的對(duì)比，證明H

2、O-1抗凋亡的能力。在未用任何刺激劑的條件下，未轉(zhuǎn)染進(jìn)HO-1cDNA的細(xì)胞的凋亡率是轉(zhuǎn)染進(jìn)的5-23倍。采用用Hemin 和SnPP分別刺激細(xì)胞，促進(jìn)和抑止HO-1在細(xì)胞中的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示經(jīng)Hemin處理過(guò)的細(xì)胞的凋亡率均在20％以下，而SnPP處理過(guò)的細(xì)胞的凋亡率大幅的上升，最高可達(dá)到95％以上。整個(gè)數(shù)據(jù)顯示HO-1的表達(dá)被抑止時(shí)細(xì)胞的凋亡率是HO-1的表達(dá)被誘導(dǎo)時(shí)的5－20倍左右。實(shí)驗(yàn)證明細(xì)胞的凋亡率與質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率成反比，H