慢性體外反搏對血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護作用及分子機制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、體外反搏可提高心臟舒張期回心血流量,增加冠狀動脈血流灌注量,在心舒張期明顯的提高動脈血管的血流切應(yīng)力,長期體外反搏可改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能,對防治動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展有顯著的效果。 目前國外有關(guān)體外反搏對冠心病、心絞痛的治療多偏重于臨床研究。體外反搏對血管內(nèi)皮細(xì)胞作用的分子機制則有待進一步深入研究。采用cDNA基因芯片對豬動脈組織的基因表達譜進行定量分析近期國外已有報道。 有關(guān)將cDNA基因芯片用于血流切應(yīng)力對血管內(nèi)皮

2、細(xì)胞效應(yīng)研究的動物實驗尚無報道。本課題選用的是cDNA基因芯片,所有基因可從Genebank中查找到,含有大部分與血管內(nèi)皮功能相關(guān)的基因,因此可以比較全面的分析體外反搏對血管內(nèi)皮細(xì)胞作用的分子機制。 第一部分: 探討豬動脈粥樣硬化模型建立的方法,初步評價慢性體外反搏對防治動脈粥樣硬化效果。方法:選雄性乳豬n=20用高脂喂養(yǎng)建立動脈粥樣硬化模型,對模型豬進行32h體外反搏治療。結(jié)果:腹主動脈蘇丹III染色圖像定量分析,高脂

3、組:7.84%±2.37%:反搏組:1.26%±0.36%,兩組差異顯著(P<0.05)。冠狀動脈左旋支1:500掃描電鏡顯示:高脂+反搏組為血管內(nèi)膜細(xì)胞排列有序,內(nèi)皮細(xì)胞呈梭型排列與血流方向相同,表面光滑:高脂組血管內(nèi)膜細(xì)胞排列紊亂,表面不光滑,有大量脫落細(xì)胞。結(jié)論:高脂喂養(yǎng)對建立豬動脈粥樣硬化模型是可行的,慢性體外反搏對防治動脈粥樣硬化效果明顯。 第二部分: 用cDNA基因芯片對豬的胸動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞基因表達譜進行量

4、化分析,對芯片中顯著改變的基因CTGF進行進~步分析,分別做腹主動脈和冠狀動脈CTGF蛋白的免疫組化,主動脈弓CTGF蛋白Westernblot定量分析。結(jié)果:表達呈顯著改變的基因,芯片1(反搏組Cy3/高脂組Cy5):鋅指蛋白0.33、MAP4K30.13、長鏈脂肪酸合成酶0.35、神經(jīng)介素B受體0.19、GPX-13.26、整臺素β10.06、CTGF0.28、eNOS3.1、VCAM-10.50。芯片2(高脂組Cy3/正常組Cy5

5、):鋅指蛋白23.06、MAP4K36.75、長鏈脂肪酸合成酶2.71、神經(jīng)介素B受體6.68、GPX-10.63、整合素β16.29、CTGF2.45。芯片3(反搏組Cy3/高脂組Cy5):MAP4K30.84、長鏈脂肪酸合成酶0.09、整合素β10.62、CTGF0.39、VCAM-10.48、eNOS2.69。腹主動脈和冠狀動脈CTGF免疫組化,高脂組呈陽性,正常和反搏組為陰性。主動脈弓CTGFWesternblot高脂組顯著高于

6、另外兩組P<0.05,正常組與反搏組之間無顯著性差異。結(jié)論:慢性體外反搏可以改善血管內(nèi)皮功能,增加血管內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化作用,下調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞機械性刺激感應(yīng)蛋白基因的表達,降低血管內(nèi)皮細(xì)胞對LDL的攝取,及下調(diào)炎癥因子基因表達,起到抗動脈粥樣硬化的作用。 第三部分: 用cDNA基因芯片分析體外反搏治療病人血清對血管內(nèi)皮細(xì)胞基因表達的調(diào)控效應(yīng)。方法:分別取經(jīng)1次反搏、24次反搏、36次反搏治療的冠心病人血清分別同時培養(yǎng)來自三個人臍

7、靜脈的血管內(nèi)皮細(xì)胞,再用cDNA基因芯片檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)基因的表達譜,通過比較3塊芯片基因表達譜來了解體外反搏的療效。結(jié)果:有9個基因表達在3個治療點上出現(xiàn)顯著改變,分別是,核轉(zhuǎn)錄因子、真核轉(zhuǎn)錄啟動因子4γ1、平滑肌的肌球蛋白重鏈、微管蛋白β肽鏈、組織相容蛋白G、黑色素粘附分子、神經(jīng)介素B受體、蛋白激酶4K2、血小板凝血酶敏感蛋白1,并均為1次反搏上調(diào),24次反搏、36次反搏逐漸下調(diào)。采用RT-PCR方法對血小板凝血酶敏感蛋白1基因

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