地爾硫卓對血管緊張素Ⅱ損傷內(nèi)皮細胞的保護作用及其可能機制研究.pdf

1、目的:探討地爾硫卓(Diltiazem，Dil)對血管緊張素Ⅱ(Ang-Ⅱ)損傷的人臍靜脈內(nèi)皮細胞的保護作用及其可能的機制。
　　方法:體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human Umbilical VeinEndothelial Cells，HUVECs)，用10-6M的Ang-Ⅱ作為損傷因子模擬體外損傷模型，以氯沙坦(Losartan，LT)為陽性藥物對照，觀察Dil對Ang-Ⅱ損傷的HUVECs的保護作用及其保護作用是否與GHSR

2、Ia受體有關(guān)。細胞分組:(1)正常對照組;(2) Ang-Ⅱ(10-8M、10-7M、10-6M、10-5M)損傷組;(3) Dil(10-8M、10-7M、10-6M)+Ang-Ⅱ(10-6M)組;(4)[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)+Dil(10-6M)+Ang-Ⅱ(10-6M)組;(5) LT(10-6M)+Ang-Ⅱ(10-6M)組;(6) Dil(10-6M)組;(7)[D-Lys3]-GHRP-6(GHSRIa受

3、體選擇性阻斷劑，25μM)組。細胞貼壁后，隨機分組，加GHSRIa阻斷劑[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預(yù)孵育細胞30min，然后分別加入Dil(10-8M、10-7M、10-6M)及LT(10-6M)處理細胞30min，最后再加入Ang-Ⅱ(10-6M)處理細胞24h。MTT檢測HUVECs細胞活力;流式細胞術(shù)檢測HUVECs凋亡率及HUVECs中活性氧水平;比色法檢測細胞培養(yǎng)上清液中NO含量和乳酸脫氫酶(Lactic de

4、hydrogenase，LDH)活性;Real time PCR檢測HUVECs中eNOS和p47phox mRNA表達;Western blot檢測HUVECs中eNOS及p47phox蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　1.各藥物對細胞活力的影響:(1)與對照組相比較，Ang-Ⅱ(10-7M、10-6M、10-5M)呈濃度依賴性及時間依賴性降低細胞活力（P＜0.05）;
　　(2)與損傷組(10-6M)相比較，Dil呈濃度

5、依賴性提高細胞活力(P＜0.05)。
　　2.各藥物對細胞凋亡率的影響:(1)與對照組相比較，Ang-Ⅱ呈濃度依賴性增加HUVECs細胞凋亡率(P＜0.05);(2) Dil預(yù)處理細胞30min呈濃度依賴性降低細胞凋亡率(P＜0.05);(3)與Dil(10-6M)+Ang-Ⅱ(10-6M)組相比較，[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預(yù)孵育細胞30min明顯增加細胞凋亡率(P＜0.05)。
　　3.各藥物對細胞產(chǎn)生活

6、性氧的影響:(1) Dil預(yù)處理組濃度依賴性降低HUVECs中產(chǎn)生的活性氧（P＜0.05）;(2)與Dil(10-6M)+ Ang-Ⅱ組相比較，[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預(yù)孵育細胞30min，細胞活性氧水平顯著升高（P＜0.05）。
　　4.各藥物對細胞上清液中NO和LDH釋放的影響:(1) Dil預(yù)處理組顯著增加細胞上清液中NO含量(P＜0.05)，降低LDH活性(P＜0.05);(2)與Dil(10-6M)+A

7、ng-Ⅱ組相比較，[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預(yù)孵育細胞30min明顯減少細胞上清液中NO含量，增加LDH活性(P＜0.05)。
　　5.各藥物對細胞eNOS mRNA及其蛋白表達的影響:(1) Dil預(yù)處理組顯著上調(diào)細胞eNOS mRNA及其蛋白表達水平（P＜0.05）。(2)與Dil(10-6M)+Ang-Ⅱ(10-6M)組相比較，[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預(yù)孵育組明顯下調(diào)細胞中eNOS mRNA

8、及其蛋白表達水平(P＜0.05)。
　　6.各藥物對細胞p47phox mRNA及其蛋白表達的影響:(1) Dil預(yù)處理組下調(diào)p47phox mRNA及其蛋白表達水平(P＜0.05);(2)與Dil(10-6M)+Ang-Ⅱ(10-6M)組相比較，[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預(yù)孵育細胞30min，顯著上調(diào)細胞中p47phox mRNA及蛋白表達水平(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1) Dil對Ang