尿酸對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響及其對(duì)細(xì)胞的損傷作用.pdf

1、目的
　　觀察尿酸(UA)對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)、以及細(xì)胞凋亡與壞死的影響。
　　方法
　　體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),以0、0.05、0.10、0.20、0.30g/L濃度UA分別作用6、12、24及48h,利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)HUVEC細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞壞死率、以及活性氧(ROS)含量;采用分光光度計(jì)檢測(cè)HUVEC的超氧陰離子(O2-)含量;應(yīng)用ELISA法檢測(cè)HUVEC培養(yǎng)上清液中還原型酰胺腺嘌

2、呤二核苷酸磷酸(NADPH)、黃嘌呤氧化酶(XO)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、環(huán)加氧酶-2(COX-2)、脂加氧酶(LOX)水平;同時(shí)檢測(cè)分別使用NADPH抑制劑DPI、XO抑制劑Allo、eNOS抑制劑eNOSR后上述指標(biāo)的變化。
　　結(jié)果
　　1.HUVEC與不同濃度UA(0、0.05、0.10、0.20、0.30g/L)共培養(yǎng)不同時(shí)間(6、12、24、48h)后,細(xì)胞凋亡率顯著性增加,且細(xì)胞凋亡率隨著UA濃度增加

3、和作用時(shí)間延長(zhǎng)而顯著上升;當(dāng)UA濃度為0.30 g/L、以及作用時(shí)間為48h時(shí),細(xì)胞壞死率顯著性增加。
　　2.HUVEC與不同濃度UA(0、0.05、0.10、0.20、0.30g/L)共培養(yǎng)不同時(shí)間(6、12、24、48h)后,細(xì)胞內(nèi)ROS及O2-表達(dá)顯著性增加,且隨著刺激濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)而顯著上升;當(dāng)UA濃度為0.30g/L、以及作用時(shí)間為48h時(shí),細(xì)胞內(nèi)ROS及O2-表達(dá)明顯下降;ROS及O2-表達(dá)量與HUVEC細(xì)胞

4、凋亡率呈正相關(guān)關(guān)系。
　　3.HUVEC與不同濃度UA(0、0.05、0.10、0.20、0.30g/L)共培養(yǎng)24h后,NADPH、XO及eNOS表達(dá)量隨著UA濃度增加而顯著增加,其表達(dá)量與HUVEC細(xì)胞凋亡率高度正相關(guān);而COX-2及LOX表達(dá)量無(wú)明顯變化,其表達(dá)量與HUVEC細(xì)胞凋亡率不相關(guān)。
　　4.UA與不同氧化酶抑制劑共刺激HUVEC24h后,UA可激活NADPH、XO、eNOS表達(dá),DPI抑制NADPH及eNO

5、S表達(dá),Allo抑制XO及eNOS表達(dá),eNOSR抑制eNOS表達(dá),且DPI、Allo及eNOSR均可降低ROS及Oz表達(dá);UA+DPI+Allo組ROS及O2-表達(dá)較UA+Allo組顯著性降低,但較UA+DPI組無(wú)顯著性差異;UA+DPI+eNOSR組ROS及O2-表達(dá)較UA+DPI組及UA+eNOS組均顯著性降低。
　　結(jié)論
　　1.UA呈一定濃度依賴性和時(shí)間依賴性促進(jìn)HUVEC損傷。
　　2.UA主要通過(guò)活化氧化