氧化應(yīng)激刺激下小鼠胰島微血管內(nèi)皮細胞來源的exosomes抗氧化應(yīng)激能力研究.pdf

1、研究背景:糖尿病的發(fā)病率及患病率逐年升高,成為威脅人民健康的重大社會問題。胰島β細胞氧化受損、功能障礙是該病主要的發(fā)病機制,然而,胰島是高度血管化的微器官,越來越多的研究提示胰島微血管內(nèi)皮細胞(isletmicrovascular endothelial cells,IMECs)的氧化損傷在糖尿病發(fā)病機制中起了關(guān)鍵作用。Exosomes是由多種細胞類型均可以分泌到細胞外基質(zhì)中的一種直徑約40～100nm的膜性囊泡⑴。作為細胞間信息的傳遞

2、體,exosomes在多種病理生理條件下扮演了十分重要的角色。在本課題中,exosomes將作為溝通IMECs和IMECs之間的橋梁,研究IMECs在氧化應(yīng)激刺激下產(chǎn)生的exosomes對同種細胞發(fā)揮的抗氧化應(yīng)激效應(yīng)。
　　研究目的:研究氧化應(yīng)激刺激下小鼠胰島微血管內(nèi)皮細胞系(MS-1)來源的exosomes是否能夠增強MS-1細胞在相同氧化環(huán)境中的抗氧化應(yīng)激能力,為2型糖尿病重建胰島微循環(huán)完整性提供理論依據(jù)。
　　研究方法

3、:采用超速離心法分離得到MS-1細胞在非氧化應(yīng)激刺激和過氧化氫(H2O2)所致氧化刺激條件下分泌的exosomes(N-exo和O-exo),純化并鑒定。實驗組予以不同濃度(0,5,10,50,100μ g/mL)exosomes作用于MS-1細胞一段時間后,以既定濃度H2O2誘導MS-1細胞損傷。應(yīng)用CCK-8法和AnnexinV-PI染色流式細胞技術(shù)檢測比較各組細胞活力的差異,通過實時定量PCR檢測凋亡相關(guān)基因Caspase-3及B

4、cl-2 mRNA的水平變化。
　　研究結(jié)果:在數(shù)量上,O-exo較N-exo獲得量少(前者平均為0.3ug/106細胞,后者平均為0.6ug/106細胞,P＜0.05)。50μg/mL O-exo實驗組較N-exo和其他對照組有明顯抑制MS-1細胞凋亡的作用,AnnexinV-PI染色檢測該組細胞凋亡率約下降6.1%,CCK-8法檢測該組OD值明顯升高(p＜0.01)。Caspase-3 mRNA表達水平在加入O-exo數(shù)小時后