Apocynin抗兔離體靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的研究.pdf

1、目的：探討NADPH氧化酶抑制劑Apocynin對(duì)兔離體頸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。 方法：健康新西蘭大白兔18只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n＝9)和對(duì)照組(n=9)。實(shí)驗(yàn)組每天取NADPH氧化酶抑制劑Apocynin 15 mg，用水稀釋至10 ml灌胃；對(duì)照組每天給予同樣體積的水灌胃。連續(xù)給藥2周后取雙側(cè)頸內(nèi)靜脈，離體后置于肝素化全血37℃保存90 min后固定，通過離體缺血過程獲得氧化應(yīng)激損傷的兔頸靜脈。采用免疫

2、熒光染色觀察石蠟切片中NADPH氧化酶p47phox蛋白在血管各層的分布，采用western blotting對(duì)離體血管組織中NADPH氧化酶p47phox蛋白進(jìn)行定量分析，觀察Apocynin對(duì)NADPH氧化酶的影響。采用T3A法測(cè)量離體血管組織中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA.含量，結(jié)合電鏡觀察明確內(nèi)皮細(xì)胞損傷情況。 結(jié)果：通過免疫熒光染色觀察可見NADPH氧化酶呈現(xiàn)綠色熒光，血管內(nèi)皮細(xì)胞層分布較多，實(shí)驗(yàn)組內(nèi)皮細(xì)胞中呈現(xiàn)淡綠色熒光，對(duì)

3、照組內(nèi)皮細(xì)胞中呈現(xiàn)亮綠色熒光，提示實(shí)驗(yàn)組內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶表達(dá)受抑；通過western blotting分析NADPH氧化酶p47phox蛋白表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組為124.23±6.94，較對(duì)照組137.17±15.91明顯減少(P＜0.05)；通過TBA法測(cè)定氧化應(yīng)激過程中的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA，實(shí)驗(yàn)組MDA濃度為1.98±0.35，較對(duì)照組2.13±0.16降低(p＜0.001)，提示實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組氧化應(yīng)激損傷減輕；通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)

4、實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞都有不同程度的超微結(jié)構(gòu)損傷，實(shí)驗(yàn)組內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度明顯減輕，各組歸入不同損傷等級(jí)細(xì)胞的數(shù)量與是否使用Apocynin有極顯著的相關(guān)(p＜0.001)，提示Apocynin對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷有保護(hù)作用。 結(jié)論：Apocynin抑制了兔離體頸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞NADPH氧化酶p47phox蛋白的表達(dá)，減輕了內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的程度，能有效保護(hù)離體靜脈。其機(jī)制可能與Apocynin抑制NADPH氧化酶，使內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)活性氧