清活Ⅰ號中藥復(fù)方保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞高糖損傷的抗氧化應(yīng)激分子機(jī)制及冠心病患者氧化應(yīng)激水平測定.pdf

1、第一部分目的：前期研究發(fā)現(xiàn)清活I(lǐng)號中藥方可以降低糖尿病患者尿微量白蛋白排泄率，并具有與天然抗氧化劑N一乙酰半胱氨酸(NAC)類似的保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞高糖損傷的作用。本研究目的是探索清活I(lǐng)號中藥方保護(hù)血管內(nèi)皮高糖損傷的抗氧化應(yīng)激分子機(jī)制。 方法：采用電子順磁共振波譜儀(EPR)和氧自由基捕獲技術(shù)檢測清活I(lǐng)號中藥復(fù)方及其各組方單味藥體外清除氧自由基的能力，觀察該中藥復(fù)方對高糖培養(yǎng)bend．3內(nèi)皮細(xì)胞氧自由基生成的影響。應(yīng)用中藥血清藥理

2、學(xué)研究方法觀察該中藥復(fù)方的藥物血清對高糖培養(yǎng)SD大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。運(yùn)用RealtimeRT-PCR檢測該中藥復(fù)方對高糖培養(yǎng)bend．3內(nèi)皮細(xì)胞解偶聯(lián)蛋白(UCP)基因mRNA表達(dá)的影響，以及蛋白印跡方法測定細(xì)胞UCP蛋白分子的表達(dá)情況。 結(jié)果：清活I(lǐng)號復(fù)方可淬滅體外羥自由基模型中82．2％的自由基，其組方單味藥除了3號藥外，其它組方單藥可使模型中羥自由基減少23．1％～46．2％，中藥復(fù)方和各組方藥在一定濃度范圍內(nèi)

3、，其淬滅氧自由基的作用存在量效關(guān)系。清活I(lǐng)號復(fù)方的藥物血清和NAC一樣可改善高糖培養(yǎng)的SD大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和活力。內(nèi)皮細(xì)胞bend．3高糖培養(yǎng)時(shí)，EPR檢測到了細(xì)胞生成的超氧陰離子明顯增多，清活I(lǐng)號中藥、超氧岐化酶和NAC均可減少高糖培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞氧自由基的生成，各組EPR檢測到的氧自由基信號較高糖培養(yǎng)組分別下降了70％、56％和47．3％。RealtimeRT-PCR檢測結(jié)果：UCP．1、UCP-3在5．56mM葡萄糖培養(yǎng)組b

4、end．3細(xì)胞(NG組)和高糖培養(yǎng)的各組bend．3細(xì)胞中表達(dá)量很少或不表達(dá)，UCP-2基因mRNA的表達(dá)是單純高糖培養(yǎng)組細(xì)胞(HG組)較NG組增高(p=0．09)，清活I(lǐng)號中藥(中藥組)和NAC(NAC組)干預(yù)后則較HG組進(jìn)一步明顯上調(diào)(p分別為0．009、0．036)。Westemblot分析則在中藥組檢測到的較明顯的UCP-2蛋白分子的表達(dá)，NAC組有少量表達(dá)，HG組和NG組未檢測到明顯的UCP-2分子的表達(dá)。 結(jié)論：1．

5、清活I(lǐng)號中藥復(fù)方及其各組方藥均有較強(qiáng)的體外淬滅氧自由基作用，其中復(fù)方淬滅氧自由基的能力要明顯強(qiáng)于任何單味組方藥；2．清活I(lǐng)號復(fù)方的藥物血清具有類似天然抗氧化劑NAC減輕或是消除高糖致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用；3．高糖可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞超氧陰離子生成增多，清活I(lǐng)號中藥方具有清除細(xì)胞生成的超氧陰離子作用；4．清活I(lǐng)號保護(hù)血管內(nèi)皮損傷作用除了與該中藥方具有直接淬滅氧自由基作用外，還可能與清活I(lǐng)號中藥能上調(diào)高糖環(huán)境中內(nèi)皮細(xì)胞UCP-2的表達(dá)，減少線粒

6、體超氧陰離子生成有關(guān)。 第二部分目的：評價(jià)冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)患者氧化應(yīng)激狀態(tài)和血管內(nèi)皮功能相關(guān)血清指標(biāo)變化，為有抗氧化和保護(hù)血管內(nèi)皮功能作用的清活I(lǐng)號中藥方用于冠心病患者治療提供臨床循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。 方法：正常健康對照9．00人，經(jīng)冠狀動脈造影檢查(CAG)診斷的冠心病患者200例(CAG陽性組)和經(jīng)CAG排除的非冠心病患者135例(CAG陰性組)。評估各組人群的糖、脂代謝等情況，分光比色法測定血清抗超氧陰

7、離子自由基(02一·)活力、脂質(zhì)過氧化物(MDA)、一氧化氮合酶(總NOS和iNOS)活性和一氧化氮(NO)水平并進(jìn)行組間比較。 結(jié)果：CAG陽性組的血清抗02一’活力、總NOS和iNOS、NO水平均明顯低于正常對照組，血清MDA水平則明顯高于正常對照組(p均<0．001)。CAG陽性組血清抗02一·活力與CAG陰性組相近(p=0．634)，但MDA水平仍高于CAG陰性組，并且總NOS、iNOS和NO水平低于GAG組(p≤0．0

8、01)。CAG陰性組血清抗02一‘活力比正常對照組低(p=0．002)，MDA水平高于正常對照組(p=0．001)，總NOS水平兩組見相近(p=0．967)，但CAG陰性組的iNOS和NO水平較正常對照組低(p~0．001)。CAG陽性組中糖調(diào)節(jié)異常者的比率(55．5％)高于CAG陰性組(37％)(p=0．001)。 結(jié)論：冠心病患者存在血管內(nèi)皮功能障礙，體內(nèi)氧化應(yīng)激水平較高，其血清清除超氧陰離子能力下降；冠心病患者常合并糖調(diào)節(jié)