抗氧化劑治療紅細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的相關(guān)研究.pdf

1、人工關(guān)節(jié)置換被廣泛用于緩解疼痛和改善患者的生活質(zhì)量。隨著人口的老齡化，初次人工全髖關(guān)節(jié)和人工全膝關(guān)節(jié)置換的數(shù)量被預(yù)測(cè)將在2030年增加到現(xiàn)在數(shù)量的174％-673％。然而，隱性失血(Hidden Blood Loss，HBL)在關(guān)節(jié)置換術(shù)后經(jīng)常發(fā)生，如人工髖膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后。有研究報(bào)道稱THA圍手術(shù)期的隱性失血量達(dá)到了總失血量的30％。，此外在一髖部骨折的病例分析中發(fā)現(xiàn)在糾正脫水等造成的偏倚后，計(jì)算后的隱性失血量為547ml to1473

2、ml。此外由于止血帶的運(yùn)用，全膝人工關(guān)節(jié)置換（Total knee arthroplasty，TKA）術(shù)中出血量通常非常小，可以忽略不計(jì)。而TKA圍手術(shù)期間顯性出血量約等于術(shù)中出血量與術(shù)后引流管引流量之和。但研究發(fā)現(xiàn)，膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后傷口引流量?jī)H為總失血量的50％（依據(jù)術(shù)前術(shù)后紅細(xì)胞壓積差，通過(guò)Gross方程計(jì)算得到）。而這種不明原因?qū)е碌难t蛋白含量下降就是所謂的隱性失血，其造成的急性貧血和輸血率的增加是外科醫(yī)生主要關(guān)心的問(wèn)題之一。

3、r>　　然而隱性失血的發(fā)生機(jī)制尚不明確，之前有研究認(rèn)為研究認(rèn)為血液中脂肪小滴轉(zhuǎn)變而來(lái)的游離脂肪酸造成的紅細(xì)胞和血紅蛋白氧化應(yīng)激損傷可能是隱性失血的主要機(jī)制之一。此外，抗氧化劑術(shù)中與術(shù)后的應(yīng)用則被認(rèn)為可以保護(hù)并減少紅細(xì)胞和血紅蛋白所受到的氧化應(yīng)激損傷。與此一致的是先前的研究在動(dòng)物模型上證明了游離脂肪酸可以通過(guò)氧化應(yīng)激導(dǎo)致紅細(xì)胞和血紅蛋白的損傷。作為從葡萄籽中提取出來(lái)的一種天然抗氧化劑，原花青素(PA)具有較強(qiáng)的生物學(xué)活性，原花青素與胡蘿卜

4、素b、維生素C、E等相比表現(xiàn)出來(lái)更強(qiáng)的對(duì)于DNA和脂質(zhì)氧化等抗氧化應(yīng)激保護(hù)作用。原花青素作為一種安全又有效的抗氧化還原劑被廣泛用于多種器官缺血再灌注損傷，惡性腫瘤擴(kuò)散，胃腸功能紊亂，帕金森癥和阿爾茲海默癥的治療。
　　富氫水作為一種新型抗氧化劑，同樣已在動(dòng)物模型上被用于預(yù)防和治療氧化應(yīng)激相關(guān)疾病。富氫水已被證明可以選擇性的強(qiáng)力清除氧自由基。從而保護(hù)細(xì)胞減少氧化應(yīng)激損傷。
　　目的：考慮到氧化應(yīng)激在隱性失血機(jī)制中的可能作用，同

5、時(shí)原花青素和富氫水能否減輕這種氧化應(yīng)激損傷還有待研究，所以本研究的目的是通過(guò)測(cè)量血紅蛋白含量、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、SOD、GSH-PX、MDA和ferryl血紅蛋白含量來(lái)評(píng)估和比較原花青素和富氫水的作用。
　　方法：將實(shí)驗(yàn)小鼠分為四組，處理方法如下所述，且藥物使用的劑量則根據(jù)查閱文獻(xiàn)所得的常規(guī)劑量。
　　1.對(duì)照組在飼喂普通飲用水2周后通過(guò)尾靜脈注射20％乙醇0.5ml。
　　2.LIN（亞油酸）在飼喂普通飲用水2周后通過(guò)尾靜

6、脈注射溶有60mmol/亞油酸的20％乙醇溶液。
　　3.LIN+PA組在飼喂含有原花青素100mg/kg的普通飲用水2周后通過(guò)尾靜脈注射溶有60mmol/亞油酸的20％乙醇溶液。
　　4.LIN+HW組每日飼喂富氫水2周后通過(guò)尾靜脈注射溶有60mmol/亞油酸的20％乙醇溶液。
　　在此期間，每日觀察小鼠并稱重一到六次直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。所以小鼠均為出現(xiàn)不適反應(yīng)。分別在注射后24、48、72小時(shí)后在麻醉下從小鼠眼靜脈獲取血

7、標(biāo)本。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，血紅蛋白含量及紅細(xì)胞比容在標(biāo)本采集后即使用血常規(guī)檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)，紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查在染色后使用顯微鏡進(jìn)行觀察。剩余血液標(biāo)本則在離心后取上清存在零下80度等待后續(xù)的生物化學(xué)檢測(cè)。MDA、T-SOD、和GSH-PX通過(guò)分光光度法進(jìn)行檢測(cè)。其吸光度值分別在波長(zhǎng)為532nm、550nm和412nm時(shí)測(cè)出。所有檢測(cè)均在25度溫度下進(jìn)行。
　　結(jié)果：兩部分實(shí)驗(yàn)的結(jié)果變化趨勢(shì)基本相同，均成功構(gòu)建了隱性失血?jiǎng)游锬Ｐ停以ㄇ嗨睾透?/p>

8、氫水均能有效緩解亞油酸導(dǎo)致的紅細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。四組間小鼠的體重和小鼠的飲水量之前無(wú)明顯差異。在亞油酸注射之前，四組小鼠的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白含量未見(jiàn)明顯差異，而注射0.5ml(60mmol/l)亞油酸后三組注射小鼠與對(duì)照組小鼠的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白含量相比明顯下降，表明成功構(gòu)建了隱性失血模型。而LIN+PA組和LIN+HW組與LIN組比較后發(fā)現(xiàn)，在注射24h之后血紅蛋白含量和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)均有不同程度下降，其中LIN組，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋

9、白含量分別下降了0.66±0.34×1012/L，16.3±8.25g/L，而在LIN+PA組，分別下降了0.35±0.1×1012/L，9.1±4.01g/L.兩組之間有明顯差異(P＜0.05).在注射后48小時(shí)，兩組之間的差異依然有顯著性。此外，LIN+HW組在注射24小時(shí)后血紅蛋白含量和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)分別下降了0.45±0.22×1012/L，10.7±3.56g/L。在注射48小時(shí)后下降值(0.72±0.23×1012/L，18.2

10、±5.85g/L)與LIN組(1.15±0.48×1012/L，25.7±8.38g/L)相比有顯著性差異。同時(shí)氧化還原指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果顯示，LIN組SOD和GSH-PX活力值在注射24小時(shí)后與注射前顯著下降，且在48小時(shí)達(dá)到最低值，在注射后72小時(shí)有輕度上調(diào)。LIN+PA組和LIN+HW組在上述兩個(gè)指標(biāo)上也表現(xiàn)出相同的變化趨勢(shì)，然而在各時(shí)間點(diǎn)LIN+PA組和LIN+HW組的SOD和GSH-PX活力值均明顯高于LIN組。而MDA值在LIN

11、組在注射后24小時(shí)達(dá)到峰值，然后逐漸降低。LIN+PA組和LIN+HW組也表現(xiàn)出了相同的變化趨勢(shì)。而在各時(shí)間點(diǎn)LIN+PA組和LIN+HW組的MDA值始終低于LIN組。紅細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察通過(guò)與對(duì)照組對(duì)比后發(fā)現(xiàn)在注射后可以看見(jiàn)一部分紅細(xì)胞出現(xiàn)皺縮變形甚至破裂，且在注射后24小時(shí)表現(xiàn)最為明顯。此在在LIN+PA組和LIN+HW組依然可以看見(jiàn)少量皺縮變形的紅細(xì)胞，但很難發(fā)現(xiàn)破裂的紅細(xì)胞。
　　結(jié)論：原花青素和富氫水均可以在小鼠隱性失血模