抗氧化劑對鈾礦塵致人巨噬細胞功能損傷的保護作用.pdf

1、目的
　　探究鈾礦塵對人巨噬細胞功能影響的研究以及四種抗氧化劑(NAC、SOD、CAT、甘露醇)對鈾礦塵介導的巨噬細胞損傷保護作用，為降低鈾礦塵致肺損傷尋找防護劑提供實驗依據。
　　方法
　　將實驗分為對照組(0μg/cm2)和實驗組(25、50、100、200和400μg/cm2)，通過MTT法檢測鈾礦塵對人巨噬細胞(THP-1)存活率影響的時效關系；采用Annexin-V FITC/PI雙染法以及Hoechst33

2、258熒光標記法來分析鈾礦塵對人巨噬細胞凋亡率和凋亡形態(tài)學的影響；經2,7-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)染色后，采用熒光顯微鏡及化學/熒光發(fā)光儀檢測鈾礦塵對人巨噬細胞內活性氧(ROS)水平的變化情況；分別用熒光染料JC-10、FLUO-8AM、CMFDA染色后，化學/熒光發(fā)光儀檢測THP-1巨噬細胞線粒體膜電位、細胞內游離鈣離子(Ca2+)及胞內谷胱甘肽(GSH)水平的變化情況；FITC標記的大腸桿菌與不同濃度鈾礦塵處理12 h

3、后的THP-1巨噬細胞共同孵育2 h，化學/熒光發(fā)光儀檢測其熒光強度，分析鈾礦塵對THP-1巨噬細胞吞噬功能的影響；液體懸浮芯片系統(tǒng)檢測各實驗組細胞因子(IL-1β、GM-CSF、TNF-α、IL-8等)時效關系的變化特征。
　　抗氧化劑(NAC、SOD、CAT、甘露醇)孵育 THP-1巨噬細胞后，檢測鈾礦塵致巨噬細胞損傷后細胞凋亡、凋亡相關指標、吞噬功能以及細胞因子的變化情況，比較研究四種抗氧化劑對鈾礦塵致人巨噬細胞功能損傷的保

4、護作用。
　　結果
　　鈾礦塵染毒人巨噬細胞后，細胞存活率呈暴露時間和劑量依賴性下降。胞內ROS的變化水平和細胞凋亡率與染毒劑量呈正相關，上升的ROS水平加快GSH耗竭。同時伴隨線粒體跨膜電位的下降與胞內Ca2+水平上升。細胞的吞噬功能隨著鈾礦塵濃度的升高而逐漸被抑制，低劑量鈾礦塵處理時 IL-1β、GM-CSF、TNF-α和IL-8等細胞因子的表達量呈逐漸增加狀態(tài)，加快了炎癥反應。
　　四種抗氧化劑(SOD、CAT、

5、甘露醇、NAC)孵育 THP-1巨噬細胞后，存活率較處理前明顯上升，凋亡率也呈下降趨勢，氧化損傷指標影響的(ROS和GSH變化水平)也呈對應變化趨勢。其中，NAC和甘露醇組作用效果最為明顯。NAC孵育后較孵育前能明顯抑制巨噬細胞吞噬功能的降低，IL-1β、GM-CSF、TNF-α、IL-8等細胞因子的上升幅度較孵育前也明顯降低。胞內活性氧自由基(H2O2、O2-·、·OH等)的產生與鈾礦塵致人巨噬功能損傷呈正相關，·OH可能是細胞損傷過

6、程中最主要的活性氧自由基，其具體作用機制需要進一步研究。
　　結論
　　1．鈾礦塵能誘導 THP-1巨噬細胞凋亡，降低細胞存活率，早期鈾礦塵致細胞損傷是以凋亡為主的毒性影響。
　　2．鈾礦塵可以抑制THP-1巨噬細胞的吞噬功能，可使胞內ROS水平上升以及GSH相對水平含量降低。鈾礦塵致巨噬細胞功能損傷過程中，能引起TNF-α、IL-8、TGF-β等細胞因子含量的升高。
　　3．NAC、CAT、SOD、甘露醇四種抗