氧化應(yīng)激對(duì)胰島β細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的：探討氧化應(yīng)激(oxidative stress)對(duì)胰島β細(xì)胞胰島素和C肽分泌功能的影響，并初步探討其可能機(jī)制。 方法：體外低糖培養(yǎng)RIN胰島β細(xì)胞，以葡萄糖/葡萄糖氧化酶(glucose/glucose oxidase，G/GO)為過氧化氫(hydrogen dioxide，H<,2>O<,2>)產(chǎn)生體系，作用于培養(yǎng)細(xì)胞，摸擬體內(nèi)氧化應(yīng)激水平。將細(xì)胞分為六組，A組為對(duì)照組，B、C、D、 E、F組分別加入終濃度為2mU/ml

2、、5mU/ml、10mU/ml、20mU/m1、20mU/ml的GO，并在F組加入終濃度為200U/ml的過氧化氫酶(hydrogen peFOXidase,CAT)，以DCFH-DA為細(xì)胞內(nèi)H<,2>O<,2>熒光探針，以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)H<,2>O<,2>，以RT-PCR方法檢測(cè)不同濃度G/G0體系作用下細(xì)胞內(nèi)胰腺十二指腸同源異型盒(pancreas duodenum homeobox factor-1，PDX-1)的 mRNA

3、表達(dá)，并用化學(xué)發(fā)光法和放射免疫法檢測(cè)不同濃度G/GO體系作用下上清液的胰島素和C肽濃度。 結(jié)果：1．B、C、D、E四組，隨著加入G/G0體系中GO濃度的升高，細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的H<,2>O<,2>逐漸升高。2．隨著H<,2>O<,2>生成的增多，B、C、D、E四組細(xì)胞內(nèi)PDX-1的mRNA的表達(dá)逐步減少，加入CAT清除H<,2>O<,2>，則細(xì)胞內(nèi)PDX-1的mRNA的表達(dá)又明顯升高。3．隨著H<,2>O<,2>生成的增多，胰島β細(xì)胞

4、分泌的胰島素及C肽量也逐漸減少。加入CAT清除H<,2>O<,2>后則可部分逆轉(zhuǎn)這一趨勢(shì)。4．對(duì)各組細(xì)胞內(nèi)H<,2>O<,2>的生成同PDX-1的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析，再對(duì)細(xì)胞內(nèi)PDX-1的 mRNA的表達(dá)程度和胰島素、C肽的分泌量進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)H<,2>O<,2>的生成同PDX-1mRNA的表達(dá)成負(fù)相關(guān)，而PDX-1的mRNA的表達(dá)則同胰島素、C肽的分泌呈正相關(guān)。 結(jié)論：氧化應(yīng)激可減少胰島β細(xì)胞內(nèi)的PDX-1的mRNA的表