紅芪多糖對腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷保護作用的差異蛋白質(zhì)研究.pdf

1、目的：研究紅芪多糖(Hedysari Radix polysaccharides，HRP)對氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)誘導(dǎo)的人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human bain microvascular endothelial cells，HBMEC)氧化損傷模型的保護作用及分子機制。
　　方法：采用50μg/mL的ox-LDL誘導(dǎo)氧化損傷細(xì)胞模型，MTT法測定不同濃度

2、的HRP對ox-LDL誘導(dǎo)的人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷模型的保護作用，并于倒置相差顯微鏡下觀察各組HBMEC細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。以20μg/mL的紅芪多糖干預(yù)HBMEC氧化損傷模型24h后，使用細(xì)胞裂解液提取細(xì)胞總蛋白并純化，并在最優(yōu)化的聚焦條件下使用雙向凝膠電泳分離純化后的HBMEC細(xì)胞蛋白，考馬斯亮藍(lán)染色后掃描凝膠獲得蛋白圖譜。設(shè)置對照組、50μg/mL ox-LDL模型組和HRP藥物干預(yù)組，提取每組HBMEC細(xì)胞的總蛋白并獲得蛋白圖

3、譜。使用PD Quest8.0軟件分析藥物組與模型組間的差異蛋白點，應(yīng)用質(zhì)譜技術(shù)鑒定差異明顯的蛋白點。
　　結(jié)果：1.50μg/mL的ox-LDL能夠成功誘導(dǎo)造成氧化損傷細(xì)胞模型；2.5、5、10、20、40μg/mL HRP藥物組細(xì)胞存活率比氧化損傷模型組明顯升高，細(xì)胞數(shù)目明顯增多，細(xì)胞形態(tài)較模型組明顯改善。
　　2.采用丙酮沉淀法純化HBMEC細(xì)胞蛋白，最優(yōu)化的聚焦條件下進行蛋白分離，成功建立了HBMEC細(xì)胞蛋白雙向電泳

4、條件，得到蛋白圖譜。
　　3.所得2-DE圖譜通過軟件PD Quest8.0分析結(jié)果如下：紅芪多糖組HBMEC細(xì)胞蛋白表達(dá)譜發(fā)生明顯改變，分析得出11個差異蛋白點，采用質(zhì)譜方法成功鑒定了7個差異蛋白質(zhì)，分別為熱休克蛋白70、谷胱甘肽合成酶、網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白、26S蛋白酶調(diào)節(jié)亞基、γ-烯醇酶、40S核糖體蛋白和78kDa葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白，其中5個蛋白高表達(dá)，2個蛋白低表達(dá)。
　　結(jié)論：紅芪多糖對ox-LDL誘導(dǎo)的HBMEC氧化損傷