PKCδ抑制劑對脂多糖誘導大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞損傷的干預作用.pdf

1、目的：研究蛋白激酶C的亞型PKC6在大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞(RPMVEC)中的表達，通過觀察脂多糖(LPS)誘導的RPMVEC損傷時PKC表達的變化，以及PKC6抑制劑楸毒素(Rottlerin)對單層通透性增高的干預作用。探討PKC特異性亞型在LPS誘導的RPMVEC損傷中的作用。 方法：在體外分離、培養(yǎng)的RPMVEC的基礎上進行PKC6的Western印跡和免疫組化檢測，以及LPS作用后PKC8表達的變化。用針頭式濾器檢測LP

2、S及LPS+Rottlerin干預后RPMVEC單層濾過系數(shù)(Kf)的變化。 結(jié)果1體外成功分離培養(yǎng)RPMVEC，經(jīng)形態(tài)學、VIII因子相關抗原及FITC—BSI結(jié)合實驗證實所獲得為RPMVEC：在細胞傳代時采用含有EDTA的胰蛋白酶，縮短了消化傳代的時間，減少了傳代過程中胰蛋白酶對細胞的損傷；成功進行了細胞的冷凍和復蘇，為今后的實驗打下基礎。2首先通過采用免疫組化的方法明確了PKC6在RPMVEC中有廣泛的表達，其表達部位位于

3、胞漿。Western印跡檢測PKC6出現(xiàn)一條蛋白印跡條帶，分子質(zhì)量與蛋白質(zhì)分子質(zhì)量Mark相比，約為77KD，進一步證實了PKC6在RPMVEC中存在。采用10ug／mlLPS作用RPMVEC60min后與正常對照組比較，PKC6表達明顯增高。310ug／mlLPS、5uM／LRottlerin分別作用15、30、60、90、120min，LPS組RPMVEC單層的Kf值較對照組顯著增高，Rottlerin組較對照組無明顯差異。Rott

4、lerin+LPS組各時相點Kf值顯著低于LPS組。 結(jié)論：1成功進行原代培養(yǎng)RPbWEC，形態(tài)學、VIII因子相關抗原及FITC-BSI結(jié)合實驗證實所獲得為RPMVEC、并在對傳代方法改進后成功對細胞進行冷凍和復蘇。2采用免疫組化的方法證實了PKC8在RPMVEC中有表達，其表達部位在細胞漿；LPS可導致RPMVEC表達PKC6增高。3采用PKC6特異性抑制劑Rottlerin可部分抑制LPS導致的RPMVEC單層通透性增高，