bFGF基因轉(zhuǎn)染BMSCs對肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用研究.pdf

1、目的：COPD是一種常見的慢性呼吸道疾病，當(dāng)前治療主要以控制癥狀為主，本研究采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將堿性成纖維細(xì)胞生長因子基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后，與肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)，觀察轉(zhuǎn)染后的干細(xì)胞對肺微血管細(xì)胞的作用，以探索治療COPD的新思路及新方法。
　　方法：選取4周齡的SD大鼠（雄雌不限），采用骨髓貼壁細(xì)胞培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）。外購bFGF-pcDNA3.1重組質(zhì)粒，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將含有bFGF基

2、因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入BMSCs，熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率，Western-blot法觀察重組質(zhì)粒 bFGF-pcDNA3.1轉(zhuǎn)染及其目的蛋白的表達(dá)。轉(zhuǎn)染后的bFGF-pcDNA3.1-BMSCs通過與肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞在transwell體系下共培養(yǎng)。本課題分為6個實(shí)驗(yàn)組，一個空白對照組，6個實(shí)驗(yàn)組分別為重組質(zhì)粒組（A組）、空白質(zhì)粒組（B組）、重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（C組）、空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（D組）、BMSCs組(E組)、PBS組(F組)，空白對照組：單純

3、的肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)組，A組：重組質(zhì)粒bFGF-pcDNA3.1與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)，B組：空白質(zhì)粒pcDNA3.1與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)，C組：bFGF-pcDNA3.1-BMSCs與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)，D組：pcDNA3.1-BMSCs與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)，E組：BMSCs與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)，F(xiàn)組：PBS液與血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)，以上各組細(xì)胞共培養(yǎng)后24h，48h，72h后觀察肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖率情況。
　　結(jié)果

4、：1、成功提取并培養(yǎng)BMSCs，流式細(xì)胞儀表型檢測CD29、CD90陽性，CD34及CD11B陰性，所鑒定的即為所需BMSCs；2、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSCs后，熒光顯微鏡可見綠色熒光蛋白，初步表轉(zhuǎn)染成功；3、重組質(zhì)粒攜帶的bFGF基因成功轉(zhuǎn)染入BMSCs中并通過Western-blot法檢測其大量表達(dá)bFGF蛋白；4、重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組為肺血管內(nèi)皮細(xì)胞增值率最高的組別，其與 PBS組、重組質(zhì)粒及空白質(zhì)粒組的細(xì)胞增值率對比，其均 P<0.05；與空

5、白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組及BMSCs組相比，統(tǒng)計后均P>0.05，但其較空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組及BMSCs組肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖率有增高趨勢，且增高趨勢隨共培養(yǎng)時間延長，增高趨勢越明顯?？瞻踪|(zhì)粒轉(zhuǎn)染組與PBS組、重組質(zhì)粒及空白質(zhì)粒組的細(xì)胞增值率對比，均P<0.05，與BMSCs組相比，P>0.05。BMSCs組與PBS組、重組質(zhì)粒及空白質(zhì)粒組的細(xì)胞增值率對比，均P<0.05。
　　結(jié)論：1.采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法成功將bFGF基因?qū)隑MSCs并能大量表