bFGF基因轉染BMSCs對肺微血管內(nèi)皮細胞的作用研究.pdf

1、目的：COPD是一種常見的慢性呼吸道疾病，當前治療主要以控制癥狀為主，本研究采用基因轉染技術，將堿性成纖維細胞生長因子基因轉染骨髓間充質干細胞后，與肺微血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)，觀察轉染后的干細胞對肺微血管細胞的作用，以探索治療COPD的新思路及新方法。
　　方法：選取4周齡的SD大鼠（雄雌不限），采用骨髓貼壁細胞培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質干細胞（BMSCs）。外購bFGF-pcDNA3.1重組質粒，采用脂質體轉染法將含有bFGF基

2、因的質粒轉染入BMSCs，熒光顯微鏡觀察轉染效率，Western-blot法觀察重組質粒 bFGF-pcDNA3.1轉染及其目的蛋白的表達。轉染后的bFGF-pcDNA3.1-BMSCs通過與肺微血管內(nèi)皮細胞在transwell體系下共培養(yǎng)。本課題分為6個實驗組，一個空白對照組，6個實驗組分別為重組質粒組（A組）、空白質粒組（B組）、重組質粒轉染組（C組）、空白質粒轉染組（D組）、BMSCs組(E組)、PBS組(F組)，空白對照組：單純

3、的肺微血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)組，A組：重組質粒bFGF-pcDNA3.1與肺血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)，B組：空白質粒pcDNA3.1與肺血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)，C組：bFGF-pcDNA3.1-BMSCs與肺血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)，D組：pcDNA3.1-BMSCs與肺血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)，E組：BMSCs與肺血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)，F(xiàn)組：PBS液與血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)，以上各組細胞共培養(yǎng)后24h，48h，72h后觀察肺微血管內(nèi)皮細胞的增殖率情況。
　　結果

4、：1、成功提取并培養(yǎng)BMSCs，流式細胞儀表型檢測CD29、CD90陽性，CD34及CD11B陰性，所鑒定的即為所需BMSCs；2、質粒轉染BMSCs后，熒光顯微鏡可見綠色熒光蛋白，初步表轉染成功；3、重組質粒攜帶的bFGF基因成功轉染入BMSCs中并通過Western-blot法檢測其大量表達bFGF蛋白；4、重組質粒轉染組為肺血管內(nèi)皮細胞增值率最高的組別，其與 PBS組、重組質粒及空白質粒組的細胞增值率對比，其均 P<0.05；與空

5、白質粒轉染組及BMSCs組相比，統(tǒng)計后均P>0.05，但其較空白質粒轉染組及BMSCs組肺微血管內(nèi)皮細胞的增殖率有增高趨勢，且增高趨勢隨共培養(yǎng)時間延長，增高趨勢越明顯?？瞻踪|粒轉染組與PBS組、重組質粒及空白質粒組的細胞增值率對比，均P<0.05，與BMSCs組相比，P>0.05。BMSCs組與PBS組、重組質粒及空白質粒組的細胞增值率對比，均P<0.05。
　　結論：1.采用脂質體轉染法成功將bFGF基因導入BMSCs并能大量表