血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞（BMSCs）促進骨缺損修復(fù)的實驗研究.pdf

1、本文分四部分論述了血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞（BMSCs）促進骨缺損修復(fù)的實驗研究?！　∫弧⒀軆?nèi)皮細胞生長因子(VEGF)基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞(BMSCs)及其表達的檢測?！　∧康模簽榱颂接懷軆?nèi)皮細胞生長因子(VEGF)基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞(BMSCs)的表達。　　方法：體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓基質(zhì)干細胞，傳代培養(yǎng)后以lulPcDNA3．1．hVEGFl65：3ul陽離子脂質(zhì)體Lipofectam

2、ine的比例轉(zhuǎn)染，通過RT-PCR、免疫組化S-P法檢測轉(zhuǎn)染細胞外源性VEGFl65基因瞬時表達與穩(wěn)定表達，采用ELISA進行其VEGF蛋白表達量的檢測，并觀察轉(zhuǎn)染后細胞生長增殖情況，與空載體轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組相對照?！　〗Y(jié)果：基因轉(zhuǎn)染后細胞生長增殖與對照組相仿，基因轉(zhuǎn)染后48h和篩選培養(yǎng)4周后，RT-PCR和免疫組化都能檢測到VEGF基因的轉(zhuǎn)錄及表達，而空載體轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組未見其轉(zhuǎn)錄及表達。ELISA定量測定顯示轉(zhuǎn)染細胞VEGF表達

3、在l周內(nèi)逐漸增高，1周后則逐漸下降?！　〗Y(jié)論：　　1、通過脂質(zhì)體能成功的將hVEGFl 65基因轉(zhuǎn)入BMSCs并轉(zhuǎn)錄及表達VEGF蛋白，其蛋白表達量在1周時達最高，然后其表達分泌量逐漸下降?！　?、基因轉(zhuǎn)染后BMSCs經(jīng)G41 8篩選培養(yǎng)后可獲得穩(wěn)定表達?！　《VEGF165基因轉(zhuǎn)染對BMSCs生物學(xué)特性的影響及其分泌蛋白功能的檢測。　　目的：觀察hVEGFl65基因轉(zhuǎn)染后BMSCs分泌的VEGF蛋白是否有生物學(xué)效應(yīng)及其對

4、BMSCs成骨表型的影響?！　》椒ǎ后w外分離、培養(yǎng)大鼠腎微血管內(nèi)皮細胞，并通過免疫組化方法對其進行鑒定。采用MTT法觀察基因轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染組、空載體轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染組的細胞上清及基因轉(zhuǎn)染后l周的細胞上清對大鼠腎微血管內(nèi)皮細胞生長增殖的影響。并檢測基因轉(zhuǎn)染后細胞在不同條件培養(yǎng)下ALP及OCN表達分泌量?！　〗Y(jié)果：體外分離、培養(yǎng)出的大鼠腎微血管內(nèi)皮細胞第Ⅷ因子相關(guān)抗原陽性。基因轉(zhuǎn)染組細胞上清能明顯促進大鼠腎微血管內(nèi)皮細胞的增殖，與空載體

5、轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染組相比有顯著性差異，基因轉(zhuǎn)染后1周比轉(zhuǎn)染后48h的細胞上清更能促進MVEC的增殖，兩者有顯著性差異。在成骨條件培養(yǎng)下，基因轉(zhuǎn)染組細胞ALP和OCN的表達分泌量明顯高于空載體轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組，而在正常條件培養(yǎng)下，基因轉(zhuǎn)染組細胞ALP和OCN的表達分泌量較低?！　〗Y(jié)論：　　1．在體外能成功的分離、培養(yǎng)出大鼠腎微血管內(nèi)皮細胞?！　?．基因修飾后的BMSCs所分泌的VEGF蛋白能促進MVEC增殖，并且呈劑量依賴性?！　?．

6、成骨培養(yǎng)條件下，VEGFl65基因轉(zhuǎn)染能促進BMSCs體外成骨能力?！　∪?、轉(zhuǎn)染后BMSOs與納米級人T骨復(fù)合培養(yǎng)及其在裸鼠體內(nèi)血管化及異位成骨的研究?！　∧康模河^察VEGFl65基因轉(zhuǎn)染后BMSCs與納米級人工骨(NHAC)體外復(fù)合培養(yǎng)及其植入裸鼠體內(nèi)后人工骨血管化和成骨情況。　　方法：將基因轉(zhuǎn)染后的BMSCs與納米級人工骨復(fù)合培養(yǎng)，通過掃描電鏡觀察其在人工骨上生長情況。將此復(fù)合物植入裸鼠體內(nèi)，4周后組織形態(tài)學(xué)觀察其在體內(nèi)血管化

7、及異位成骨的情況?！　〗Y(jié)果：基因轉(zhuǎn)染后BMSCs能在納米級人工骨表面生長、增殖。植入體內(nèi)后組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)染后BMSCs與納米級人工骨復(fù)合有較多新生血管和新骨形成?！　〗Y(jié)論：　　1．基因轉(zhuǎn)染后BMSCs與納米級人工骨具有良好的生物相容性?！　?．轉(zhuǎn)染后的BMSCs在體內(nèi)能加快人工骨血管化和促進成骨?！　∷?、hVEGF165基因轉(zhuǎn)染酬SCs復(fù)合納米級人工骨促進大鼠骨缺損的研究。　　目的：觀察hVEGFl65基因轉(zhuǎn)染BMSC

8、s復(fù)合納米級人工骨對骨缺損修復(fù)的作用。　　方法：SD大鼠造成橈骨5mm的骨缺損模型，將基因轉(zhuǎn)染的BMSCs與納米級人工骨復(fù)合培養(yǎng)后植入骨缺損處，分別于術(shù)后4、8、12周通過墨汁灌注法、組織學(xué)切片以及X線檢測，在12周時還進行骨密度、生物力學(xué)檢測，觀察骨缺損修復(fù)情況?！　〗Y(jié)果：基因轉(zhuǎn)染的BMSCs與納米級人工骨復(fù)合植入體內(nèi)后，毛細血管、骨小梁形成比其它組要多、要早，BMI)、生物力學(xué)、X線檢測結(jié)果顯示新生骨質(zhì)量較高，骨缺損修復(fù)情況優(yōu)于