烏司他丁對LPS誘導(dǎo)大鼠腎微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護作用.pdf

1、盡管近年重癥醫(yī)學(xué)取得了飛速進步,但膿毒癥仍是住ICU患者的第一死亡原因。膿毒癥的病理過程是炎性介質(zhì)與凝血因子相互作用的級聯(lián)瀑布反應(yīng),這個過程可能主要由于血管功能的改變,而血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷和/或功能障礙正是這些改變的中心環(huán)節(jié)。這種凝血系統(tǒng)的激活主要依賴于組織因子(tissue factor,TF)途徑,TF參與內(nèi)、外源性兩種凝血途徑的激活與放大,是凝血系統(tǒng)活化的始動因素。
　　 烏司他丁(ulinastatin,UTI)是從人類

2、尿液中提取的酸性糖蛋白,是一種廣譜的蛋白酶抑制劑,能廣泛抑制炎癥介質(zhì)釋放、保護組織器官功能,但目前關(guān)于UTI對LPS誘導(dǎo)微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用的研究甚少。本實驗在體外培養(yǎng)大鼠腎微血管內(nèi)皮細(xì)胞(renal microvascular endothelial cells,RMEC),觀察UTI對LPS誘導(dǎo)RMEC表達(dá)凝血因子TF及內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化的影響,進而探討UTI對血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用,為深入研究膿毒癥的治療提供理論基礎(chǔ)。
　　

3、方法：
　　 采用改進的三步梯度篩法體外培養(yǎng)大鼠RMEC并進行鑒定。將RMEC分為時間效應(yīng)組:LPS(10μ g/ml)分別作用0h、3h、6h、12h,UTI(800IU/ml)作用于LPS(10μg/ml)前30min,再分別孵育0h,3h、6h、12h；濃度效應(yīng)組:UTI(0 IU/ml、200IU/ml、400IUJ/ml、800IU/ml)分別作用于LPS(10μ g/ml)前30min,再孵育6h；采用RT-PCR.

4、法檢測內(nèi)皮細(xì)胞TFmRNA的表達(dá)；采用ELISA法檢測內(nèi)皮細(xì)胞上清液中TF蛋白水平；并電鏡下觀察各組細(xì)胞的形態(tài)改變。
　　 結(jié)果：
　　 與正常對照組相比,LPS誘導(dǎo)RMEC表達(dá)TF顯著升高(P<0.05),以6h達(dá)高峰；UTI能有效抑制TF表達(dá),且早期干預(yù)效果明顯(P<0.05)；電鏡下觀察正常對照組RMEC各細(xì)胞器完整；LPS組核固縮,高爾基復(fù)合體高度擴張,線粒體嵴斷裂甚至空泡變性；而UTI組則基本接近正常RMEC形