脂氧素A4保護TNF--α誘導肺微血管內(nèi)皮細胞炎癥損傷的體外實驗研究.pdf

1、論文題目：月§氫丞壘堡垃! 盟E 二! 透昱照微魚笪凼廛紲照塞瘞塑魚曲鹽處塞驗盟宜答辯委員會主席： 撿查圣答辯委員會成員： 塞亙堡旌紅旗論文答辯日期： 2 Q 1 2 生§旦2 4 目溫州睡學院頤I ：學位論文脂氧素A 4 保護T N F —f l 誘導肺微血管內(nèi)皮細胞炎癥損傷的體外實驗研究中文摘要目的建立重癥急性胰腺炎致急性肺損傷的體外模型，觀察脂氧素A ．( L X A ．)對T N F n 誘導人肺微血管內(nèi)皮細

2、胞( P M V E C s ) 炎癥損傷的保護作用。方法( 1 ) 第一階段：用不同濃度( 5 、1 0 、2 0 n g ／m 1 ) T N F —n 造成P M V E C s炎癥損傷模型，采用m T T 法檢測空白對照組及不同濃度T N F —n 組對P M V E C s 存活率的影響，咀確定T N F 一Ⅱ損傷的最適濃度。第二階段：加入不同濃度( 1 、1 0 、1 0 0 ¨g ／L ) L X A , 干預．

3、檢測T N F —d 組和不同濃度L X A ．組對p M V E C s 存活率的影響，以確定L X A ，的雖適濃度；( 2 ) 用針頭式濾器檢測T N F Ⅱ損傷前后及I 。x 軋干預后人肺微血管內(nèi)皮細胞( P M V E C s ) 單層通透性的變化：( 3 ) 2 0n g ／m I T N F —n 造模2 4 h 后采用1 0 0 u g ／L L X A 。干預2 4 h ，貼壁細胞抽提總R N A ，運用實時熒光定量P

4、 C R 方法檢測I L 一10 ，I L 一6 ，E - s e I e c t l n ．V C A M l ，M C P —l 及N F —KB p 6 5m R N A的表達情況。結果( 1 ) 隨著T N F —a 濃度的增加．用M T T 法測得吸光度逐漸降低，p M V E C s存活率顯著降低( P < O ．0 5 ) ；L X A 。呈劑量依賴性的顯著改善T N F —o 誘導所致下降的P M V E C s

5、存活率( P < O ．0 5 ) 。( 2 ) T N F —c i 損傷3 0 m i n ，6 0 m i n ，9 0 m l n P ～I V E C s單層通透系數(shù)K f 值較損傷前顯著增高( P < OO l 或P < O0 5 ) ；加入L X A ．干預時K f 值均顯著低于T N F - a 組( P < O0 1 或P < O0 5 ) 。( 3 ) 與空白對照組比較，T N F —n

6、組的I L IB ，I L 一6 ，E - s e l e c t i n ．V C A M —l ，) 4 C P - I 及N F KBp 6 5m R N A 的表達水平均有顯著升高( P < O0 1 或P < O0 5 ) ；與T N F —n 組比較，L X A ．干預組的I L 1 0 ，I L _ 6 ．Es e l e c t l n ，V C A M 一1 ，M C P —i 及N F KBp 6 5m

7、R N A 的表達水平均有顯著降低( P < O0 l 或P < O0 5 ) ；結論( 1 ) T N F —d 可以誘導P M V E C s 損傷．本實驗最適濃度為2 0 n g ／m l ；L x A 。對T N F o 誘導的P M V E C s 損傷具有保護作用，并呈劑量依賴性，峰值濃度為1 0 0ug ／L 。( 2 ) T N F —a 可使P m V E C s 單層通透系數(shù)K f 值較損傷前顯著增高，并

8、呈時問依賴性，本實驗中咀9 0 m l n 最為顯著：L x ～可顯著降低T N F o 誘導所致的P M V E C s 單層通透系數(shù)K f 值增高。( 3 ) L X A 。對T N F a 激活人腫微血管內(nèi)皮細胞后相關炎癥因子和粘附分子m R N A 的表達具有調節(jié)作用，從而抑制炎癥反應，減輕肺損傷。L X A 。產(chǎn)生上述作用的機制可能是抑制N F —KBp 6 5 的活化，阻斷～F _ KB信號傳導通路，從而抑制了I L 1 B