IL-1β對腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型的促血管生成作用研究.pdf

1、研究背景:
　　 缺血性腦血管病是一種致死率、致殘率較高的臨床常見病、多發(fā)病，給社會、家庭及個人帶來了嚴(yán)重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，因此采取有效的方法治療缺血性腦血管病，降低患者的致殘程度，提高其生活質(zhì)量，成為當(dāng)前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。因此，誘導(dǎo)缺血區(qū)新生血管的大量形成，改善缺血區(qū)腦組織的微循環(huán)，增加受累腦組織的血液供應(yīng)，保護(hù)神經(jīng)元減輕腦組織損傷，成為缺血性腦血管疾病治療的新途徑。神經(jīng)炎癥在缺血再灌注后的作用較為復(fù)雜，某些炎癥因子如白介素

2、-1β（IL-1β）可表現(xiàn)出神經(jīng)損傷和神經(jīng)保護(hù)雙向作用，如何盡量減少其神經(jīng)損傷作用而增強(qiáng)其神經(jīng)保護(hù)作用將是一個重要研究課題。
　　 研究目的:
　　 研究IL-1β對大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型的促血管生成作用。
　　 研究方法:
　　 分離純化BMEC、Ⅷ因子相關(guān)抗原(ⅧF-Ag)鑒定，細(xì)胞計數(shù)法繪制生長曲線、MTT法測定細(xì)胞活力。(2)MTT法測定不同濃度IL-1β對正常培養(yǎng)狀態(tài)BMEC活力的影響

3、。(3)純化的BMEC置于厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)4h后，再進(jìn)行復(fù)氧，建立缺氧復(fù)氧模型。(4)給予IL-1β中和抗體后，觀察BMEC自分泌的IL-1β對細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF、MMP-9蛋白表達(dá)的影響。(5)、實(shí)驗(yàn)分為正常組、缺氧復(fù)氧組、缺氧復(fù)氧+IL-1β組，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF、MMP-9蛋白水平變化；實(shí)時熒光定量PCR(qRT-PCR)測定細(xì)胞VEGF、MMP-9mRNA表達(dá)量變化。(6)建立三維細(xì)胞

4、培養(yǎng)模型，觀察IL-1β對BMEC形成小管樣結(jié)構(gòu)的作用。
　　 結(jié)果:
　　 (1)獲得了純度較高、數(shù)量較多的符合實(shí)驗(yàn)要求的BMEC，該細(xì)胞在培養(yǎng)第120h時細(xì)胞活力最強(qiáng)。(2)MTT結(jié)果顯示，1ng/m1IL-1β在加藥后12h能顯著降低大鼠BMEC的活力。(3)缺氧4h/復(fù)氧72h時，IL-1β組VEGF、MMP-9蛋白表達(dá)均高于模型組(P＜0.05)。(4)缺氧4h復(fù)氧48h，IL-1β組VEGF、MMP-9mRN