鹽酸戊乙奎醚對(duì)大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧-復(fù)氧后凋亡的影響.pdf

1、急性冠狀動(dòng)脈閉塞再灌注治療后,血管損傷造成的微血管功能障礙，限制了徹底(或完全)的組織灌注,影響治療效果。其中微血栓形成、鈣超載等可能造成微血管功能障礙,但血管內(nèi)皮功能損傷亦是其主要原因之一。解除或減輕再灌注內(nèi)皮功能損傷成為減輕再灌注損傷研究的重點(diǎn)。因此，培養(yǎng)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞，建立心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的缺氧/復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型，對(duì)研究缺血再灌注損傷的途徑及其保護(hù)有重要意義。
　　近年來研

2、究顯示，莨菪類抗膽堿藥物對(duì)心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)損傷有保護(hù)作用，而鹽酸戊乙奎醚(PenehyclidineHydrochl-oride,PHC)作用為一種新型的M1受體亞型阻斷劑，是否具有同樣作用？因此，本實(shí)驗(yàn)采用模擬I/R建立心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的H/R模型，觀察PHC預(yù)處理及H/R后給予PHC對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞是否有保護(hù)作用，了解其機(jī)制，為其在心肌再灌注損傷治療方法應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

3、r>　　研究目的：
　　從細(xì)胞水平上建立H/R模型,從細(xì)胞增殖能力、凋亡率、Caspase-3及Bcl-2蛋白表達(dá)上,觀察鹽酸戊乙奎醚是否對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的H/RI有保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
　　研究方法：
　　1.微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定本實(shí)驗(yàn)采用酶消化法及組織塊法兩種方法進(jìn)行細(xì)胞的原代培養(yǎng),1:2傳代。采用熒光標(biāo)記乙?；疍il-Ac-LDL的方法鑒定。
　　研究結(jié)果：
　　1.成功培養(yǎng)大鼠心肌微血管

4、內(nèi)皮細(xì)胞:經(jīng)微血管內(nèi)皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定結(jié)果,用熒光標(biāo)記乙?；疍il-Ac-LDL的方法鑒定為微血管內(nèi)皮細(xì)胞。
　　2.成功制備出微血管內(nèi)皮細(xì)胞的H/R模型將試驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)液改為D-Hank,s液，置于37℃、5％CO2、92％N2密閉缺氧罐中環(huán)缺氧2h，后改為完全培養(yǎng)液放入常氧培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h可制備出微血管內(nèi)皮細(xì)胞的I/R模型。
　　3.H/R組細(xì)胞死亡率和凋亡率與對(duì)照組相比明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），

5、PHC+H/R組的細(xì)胞死亡率和凋亡率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,H/R+PHC組與對(duì)照組相比，雖然細(xì)胞的死亡率和凋亡率有所下降，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　4.干預(yù)組Caspase-3均高于對(duì)照組（P<0.05），PHC+H/R組低于H/R組和H/R+PHC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），H/R+PHC組略低于H/R組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。H/R組Bcl-2明顯低于對(duì)照組（P<0.