鹽酸戊乙奎醚對(duì)膿毒癥大鼠的治療作用.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過復(fù)制膿毒癥模型，研究鹽酸戊乙奎醚對(duì)膿毒癥大鼠的治療作用。
　　 方法：
　　 1.實(shí)驗(yàn)分組及動(dòng)物模型的制備
　　 36只Wistar雄性大鼠，體重250-300g（河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）。利用隨機(jī)數(shù)字表分為3組，每組12只。假手術(shù)組（S組）、盲腸結(jié)扎穿孔組（CLP組）、鹽酸戊乙奎醚組（PHC組）。（1）假手術(shù)組（S組）：僅開腹，牽拉盲腸但不結(jié)扎。（2）盲腸結(jié)扎穿孔組（CLP組）：10％水合

2、氯醛（350mg/kg），腹腔注射麻醉。麻醉后，常規(guī)消毒腹部，皮膚正中切口，長(zhǎng)約1.5cm，打開腹腔后小心分離盲腸，避免碰傷腸系膜血管。盲腸如有糞便，則輕輕將其擠向與其相連的大腸，尋找盲腸與小腸及大腸交界處，然后用3～0號(hào)絲線環(huán)形結(jié)扎盲腸。結(jié)扎完畢應(yīng)仔細(xì)檢查，保持腸道通路暢通。在與腸系膜相對(duì)的盲端腸壁漿膜面用18號(hào)針頭穿刺二次二個(gè)針孔相距約3mm，第一針孔距離盲端約3mm。擠出適量腸內(nèi)容物，并留置一寬約0.5cm橡皮引流條貫通盲腸，以防

3、針孔閉合，輕輕將腸管放回原處，關(guān)閉腹腔，逐層縫合。（3）鹽酸戊乙奎醚組（PHC組）：CLP后立即經(jīng)腹腔注射PHC2mg/kg。各組術(shù)后通過皮下注射補(bǔ)生理鹽水3～4ml/100g。三組分別于術(shù)前、12h后經(jīng)頸動(dòng)脈采血0.3ml測(cè)定血?dú)狻Ｔ?2h采血后取大鼠心、肺、肝、腎在光鏡和電鏡下觀察各器官組織形態(tài)學(xué)變化。
　　 2.標(biāo)本的采集及檢測(cè)方法
　　 2.1動(dòng)脈血?dú)獾臋z測(cè)
　　 實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，麻醉大鼠后，將其固定在實(shí)驗(yàn)臺(tái)

4、上，消毒大鼠的頸前部皮膚，沿頸部的正中線切口，鈍性分離頸部肌肉，暴露并鈍性分離一側(cè)的頸動(dòng)脈，充分暴露后從頸動(dòng)脈取血0.3ml測(cè)量血?dú)狻?shí)驗(yàn)12h后，再次麻醉大鼠，分離另一側(cè)的頸動(dòng)脈后再次取血0.3ml測(cè)量血?dú)?。記錄血?dú)庵笜?biāo)中的動(dòng)脈血二氧化碳分壓（PaCo2）值、動(dòng)脈血氧分壓（PaO2）值、動(dòng)脈血pH值、動(dòng)脈血乳酸（Lac）值，各數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS11.5軟件進(jìn)行方差分析及t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有顯著性。
　　

5、2.2光鏡下觀察大鼠心、肺、肝、腎的形態(tài)學(xué)變化
　　 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行12h后，用放血法處死大鼠，每組兩只，取大鼠的心、肺、肝、腎，在冰盤上各器官切取厚度為3mm，面積5mm×5mm組織塊，冷鹽水沖洗干凈后置于10％的福爾馬林固定，室溫下過夜，常規(guī)制作石蠟切片，HE染色，在10×40光鏡下觀察各器官的形態(tài)學(xué)變化。
　　 2.3透射電鏡下觀察大鼠心、肺、肝的形態(tài)學(xué)變化
　　 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行12h后，用放血法處死大鼠，每組另取兩只

6、，取大鼠的心、肺、肝，按照“快、小、輕、準(zhǔn)”四字原則在冰盤上各器官切取1mm×1mm×1mm的組織塊。于4％戊二醛固定液中，4℃冰箱中保存。固定1h以上后送電鏡實(shí)驗(yàn)室，在透射電鏡下觀察大鼠心、肺、肝的形態(tài)學(xué)變化。
　　 1.各組間體重、術(shù)前血?dú)庵笜?biāo)動(dòng)脈血PaCO2值、動(dòng)脈血PaO2值、動(dòng)脈血pH值、動(dòng)脈血Lac值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.一般情況的觀察：S組的大鼠蘇醒較早，清醒后活動(dòng)基本如常，剖腹未見惡臭，腹腔水

7、腫等表現(xiàn)。CLP組的大鼠術(shù)后均有嚴(yán)重的膿毒癥表現(xiàn)：蘇醒延遲，逐漸出現(xiàn)精神萎靡，豎毛及呼吸困難等表現(xiàn)，剖腹可見惡臭味血性滲液，腸管水腫，部分盲腸壞死變黑。與CLP組相比，PHC組的大鼠臨床表現(xiàn)較輕。
　　 3.鹽酸戊乙奎醚對(duì)膿毒癥大鼠動(dòng)脈血PaCO2的影響。
　　 CLP組的大鼠動(dòng)脈血PaCO2為（61±5.7）mmHg，與S組（43±4.0）mmHg相比，顯著升高（P<0.05），PHC組的大鼠動(dòng)脈血PaCO2為（52±

8、4.4）mmHg，與CLP組相比，顯著下降（P<0.05）。
　　 4.鹽酸戊乙奎醚對(duì)膿毒癥大鼠動(dòng)脈血PaO2的影響。
　　 CLP組的大鼠動(dòng)脈血PaO2為（87±5.5）mmHg，與S組（103±6.0）mmHg相比，顯著下降（P<0.05），PHC組大鼠動(dòng)脈血PaO2為（97±4.0）mmHg，與CLP組相比，顯著升高（P<0.05）。
　　 5.鹽酸戊乙奎醚對(duì)膿毒癥大鼠動(dòng)脈血pH值的影響
　　 CL

9、P組的大鼠動(dòng)脈血pH值（7.20±0.09），與S組（7.37±0.03）相比，顯著下降（P<0.05），PHC組大鼠動(dòng)脈血pH值（7.29±0.04），與CLP組相比，顯著升高（P<0.05）。
　　 6.鹽酸戊乙奎醚對(duì)膿毒癥大鼠動(dòng)脈血Lac值的影響
　　 CLP組的大鼠動(dòng)脈血Lac值（4.5±0.8mmol/L），與S組（2.0±0.5mmol/L）相比，顯著升高（P<0.05），PHC組大鼠動(dòng)脈血Lac值（3.2±

10、0.5mmol/L），與CLP組相比顯著下降（P<0.05）。
　　 7.光鏡下觀察大鼠心、肺、肝、腎的形態(tài)學(xué)改變
　　 光鏡下（×400倍）觀察發(fā)現(xiàn)：S組心、肺、肝、腎為正常形態(tài)結(jié)構(gòu)。CLP組心肌纖維水腫，間質(zhì)充血、水腫，結(jié)構(gòu)疏松、間隙增大；肺組織水腫，肺間質(zhì)增寬并有大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；肝細(xì)胞水腫，肝竇內(nèi)及匯管區(qū)充血；腎小球毛細(xì)血管的管腔擴(kuò)張、充血，間質(zhì)血管擴(kuò)張、充血，腎小管上皮細(xì)胞水腫、管腔變窄，部分腎小管上皮空泡變

11、性或透明變性。PHC組心肌纖維及間質(zhì)輕度水腫；肺泡隔輕度增厚并少量粒細(xì)胞及紅細(xì)胞浸潤(rùn)；肝細(xì)胞輕度水腫，匯管區(qū)可見少量紅細(xì)胞，腎小管上皮細(xì)胞輕度水腫，腎小球毛細(xì)血管腔及間質(zhì)少許充血及粒細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 8.透射電鏡下觀察大鼠心、肝、肺的實(shí)質(zhì)細(xì)胞及細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)
　　 電鏡下（×20000倍）觀察發(fā)現(xiàn)：S組的大鼠心、肝、肺的實(shí)質(zhì)細(xì)胞及細(xì)胞器均為正常形態(tài)結(jié)構(gòu)。CLP組心肌纖維水腫、斷裂，線粒體水腫、空泡化，線粒體嵴消失、線粒體

12、嵴融合；肝細(xì)胞胞質(zhì)高度水腫、脂質(zhì)化，核膜破裂，線粒體嵴融合；肺基底膜缺損、疏松、不清晰，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞微絨毛排列脫落。PHC組心肌纖維輕度水腫、斷裂，線粒體輕度水腫、部分空泡化，線粒體嵴部分消失、線粒體嵴融合；肝細(xì)胞胞質(zhì)輕度水腫、脂質(zhì)化，核膜部分破裂，線粒體嵴融合；肺基底膜輕度缺損、疏松、不清晰，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞微絨毛少量脫落。
　　 總的看來：PHC組的各器官病理學(xué)損傷輕于CLP組。
　　 結(jié)論：鹽酸戊乙奎醚對(duì)膿毒癥