大黃素對IL-1β誘導大鼠腎小管上皮細胞轉分化的影響.pdf

1、目的：探討大黃素(EMD)對IL-1β誘導大鼠腎小管上皮細胞-肌成纖維細胞轉分化(TEMT)的影響。 方法：體外復蘇培養(yǎng)正常大鼠腎小管上皮細胞株(NRK52E)，取對數(shù)生長期細胞用胰酶消化、接種、同步化后分組處理：(1)對照組：僅加入含5％CS的DMEM培養(yǎng)基；(2)大黃素組：分別加入含不同濃度大黃素(12.5、25、50、100mg/L)的含5％CS的DMEM培養(yǎng)液；(3)IL-1β誘導組：加入含10μg/LIL-1β的含5％

2、CS的DMEM培養(yǎng)液；(4)IL-1β+大黃素組：同時加含IL-1β和大黃素的含5％CS的DMEM培養(yǎng)液，前者終濃度為10μg/L，后者終濃度分別為12.5、25、50、100mg/L。每組分別于培養(yǎng)至12、24、48及72h時，用倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)，用細胞免疫化學染色法檢測細胞α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)及角蛋白(CK)的表達。 結果：LIL-1β、大黃素及二者聯(lián)合對細胞形態(tài)學的影響：正常NRK52E細胞呈卵圓形貼

3、壁生長，72h時細胞形成融合的單層，呈典型的“鋪路石”樣改變。IL-1β誘導處理24h時部分細胞由卵圓形變?yōu)樗笮?，誘導48h時成梭形改變的細胞比例更大，72h時細胞雖鋪滿單層，但部分細胞拉長，細胞間隙增大，喪失典型“鋪路石”樣改變。12.5及25mg/L大黃素分別作用不同時間對細胞形態(tài)學均無明顯影響；50、100mg/L大黃素分別作用24h后部分細胞開始變圓縮小。IL-1β與大黃素聯(lián)合作用時，12.5mg/L大黃素在各時間點對IL-1β

4、誘導的細胞形態(tài)改變無明顯影響；25mg/L大黃素作用48h后可減輕IL-1β誘導的細胞梭形改變；50、100mg/L大黃素作用48h后也可減輕IL-1β誘導的細胞梭形改變，但同時部分細胞變圓縮小，變圓縮小的細胞數(shù)分別與同期50、100mg/L大黃素單獨作用時相近。2.IL-1β、大黃素及二者聯(lián)合對細胞α-SMA、CK表達的影響：細胞免疫染色顯示α-SMA及CK主要表達于胞漿，呈黃色或棕黃色。對照組細胞在各時間點均高表達CK，少量α-SM

5、A的表達。IL-1β誘導12h時細胞α-SMA表達較對照組增加、CK表達較對照組減少；誘導24h時α-SMA表達更多，CK表達進一步減少，這種改變在48h及72h時更明顯，呈時間依賴。不同濃度大黃素分別單獨作用不同的時間，對細胞α-SMA和CK的表達均無明顯影響，分別與同期對照組相比差異無顯著性。12.5mg/L大黃素明顯下調IL-1β誘導的α-SMA表達、上調CK表達，呈時間依賴。25mg/L大黃素在各時間點下調α-SMA表達、上調C

6、K表達的作用分別較同期12.5mg/L大黃素的作用更明顯。50、100mg/L大黃素分別作用不同時間，對IL-1β誘導α-SMA表達的下調以及上調CK表達的作用分別與同期25mg/L大黃素的作用相比無顯著差異。 結論：10μg/LIL-1β可時間依賴性的誘導NRK52E細胞轉分化；大黃素對IL-1β誘導的NRK52E細胞轉分化有明顯抑制作用，呈濃度、時間依賴。25mg/L大黃素作用48小時對IL-1β誘導NRK52E細胞轉分化的