不同透析方式對人腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、腎小管間質(zhì)纖維化(Renaltubulointerstitialfbrosis，RTF)是慢性腎臟疾病(chronickidneydisease，CKD)進(jìn)展到終末期腎功能衰竭的最終共同途徑，是反映腎功能下降嚴(yán)重程度和判斷預(yù)后最重要的指標(biāo)。腎小管上皮細(xì)胞(renaltubularepithelialcells，RTECs)轉(zhuǎn)分化在RTF中的作用越來越受到重視。RTECs在特定的環(huán)境下轉(zhuǎn)變成肌成纖維細(xì)胞(myofibroblast，Myo

2、F)參與RTF的發(fā)生發(fā)展。某些尿毒癥毒素(如硫酸吲哚酚、晚期糖基化終末產(chǎn)物)可促進(jìn)RTECs轉(zhuǎn)分化加劇RTF。透析是目前清除尿毒癥毒素最有效的方法之一，而研究表明不同透析方式對不同分子量尿毒癥毒素的清除效果不一樣。本研究擬通過觀察不同透析方式前后尿毒血清對體外培養(yǎng)的RTECs轉(zhuǎn)分化的影響，以探討何種透析方式能有效清除致纖維化尿毒癥毒素，對保護(hù)殘腎功能，延緩RTF的進(jìn)展具有重要意義。 [方法] 1實(shí)驗(yàn)分組：將24例尿毒癥患

3、者隨機(jī)分為血液透析(HD)、高通量血液透析(HFHD)、血液透析濾過(HDF)三組，每組8例。采用無肝素血液透析，分別于透析前后從動脈端抽取5ml血，無菌條件下抽提血清，-20℃保存。實(shí)驗(yàn)前將各組血清混勻，滅活，分裝，用DMEM/F12稀釋成10％用于實(shí)驗(yàn)。 2HK-2細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定：細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液中，常規(guī)培養(yǎng)傳代。用相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)合細(xì)胞角蛋白18(CK-18)免疫組化鑒定HK-2

4、細(xì)胞。 3二乙酰一肟法測定透析前后尿素比值，計(jì)算Kt/v值。 4RT-PCR法檢測HK-2細(xì)胞TGF-β1和α-SMAmRNA表達(dá)。 5ELISA法檢測HK-2細(xì)胞培養(yǎng)上清TGF-β1的蛋白分泌量。 [結(jié)果] 1.HK-2細(xì)胞株鑒定：相差顯微鏡觀察HK-2細(xì)胞呈多邊鵝卵石狀，如鋪路石，細(xì)胞緊密連接融合成單層。CK-18免疫細(xì)胞化學(xué)顯示CK-18在HK-2細(xì)胞呈陽性。 2.HD、HFHD、H

5、DF三組患者超濾量、透析后體重、Kt/v值組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 3.不同透析方式對HK-2細(xì)胞TGF-β1基因表達(dá)和蛋白分泌的影響：HDF組透析后尿毒血清使HK-2細(xì)胞TGF-β1基因表達(dá)和蛋白分泌水平降低，與透析前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而HD和HFHD組透析后與透析前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；HDF組透析前后TGF-β1基因表達(dá)和蛋白分泌的差值與HD、HFHD組比較，差異

6、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 4.不同透析方式對HK-2細(xì)胞α-SMA基因表達(dá)的影響：HDF組透析后尿毒血清使HK-2細(xì)胞α-SMA基因表達(dá)降低，與透析前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；而HD和HFHD組透析后與透析前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；HDF組透析前后α-SMA基因表達(dá)的差值與HD、HFHD組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 [結(jié)論] 1.HD、HFHD、HDF三種透析方式