三氧化二砷對人腎小管上皮轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、該研究首先觀察三氧化二砷(As<,2>O<,3>)對小管上皮細(xì)胞增殖和細(xì)胞活力的影響,從而選擇As<,2>O<,3>對小管上皮細(xì)胞的最佳干預(yù)濃度.體外培養(yǎng)人近端腎小管上皮細(xì)胞株(HK-2),通過MTT和臺盼藍(lán)染色法觀察不同濃度As<,2>O<,3>對小管上皮細(xì)胞增殖和細(xì)胞活力的影響;結(jié)果顯示:1)濃度為0.5、1μmol/LAs<,2>O<,3>可顯著抑制細(xì)胞增殖,與空白對照組相差異顯著(P<0.05),而兩組間無差異;2)0.1、0.

2、2μmol/LAs<,2>O<,3>組對細(xì)胞增殖無明顯影響;3)濃度為1μmol/LAs<,2>O<,3>可導(dǎo)致細(xì)胞活力明顯受損,與空白對照組相比差異顯著(P<0.01),研究提示:低濃度As<,2>O<,3>對腎小管上皮細(xì)胞增殖和細(xì)胞活力無明顯影響,而高濃度As<,2>O<,3>則明顯抑制細(xì)胞增殖并導(dǎo)致細(xì)胞死亡.這為下一步的干預(yù)處理提供了合適的濃度適用范圍.該研究第二部分探討了血小板衍化生長因子-BB(PDGF-BB)促進(jìn)腎小管上皮細(xì)

3、胞轉(zhuǎn)分化作用以及As<,2>O<,3>對其作用的干預(yù).以不同濃度的PDGF-BB刺激HK-2細(xì)胞,通過免疫熒光法觀察As<,2>O<,3>干預(yù)前后α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表達(dá)的改變;以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法測定小同濃度及不同時間點(diǎn)PDGF-BB對于HK-2細(xì)胞分泌細(xì)胞外

4、基質(zhì)(ECM)如:膠原Ⅲ(Col-Ⅲ)、纖維連接蛋白(FN)的影響;同時觀察As<,2>O<,3>干預(yù)經(jīng)PDGF-BB刺激后HK-2細(xì)胞分泌ECM的劑量和時間效應(yīng).為更好的評價As<,2>O<,3>在干預(yù)HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的作用,我們在第三部分研究中觀察了As<,2>O<,3>對由TGF-β1誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響,大量研究顯示TGF-β1是強(qiáng)有力的致纖維化生長因子,它不僅能打破腎間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)代謝大動態(tài)平衡,使其向纖維化方向