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文檔簡介
1、 背景:腎小管間質(zhì)纖維化(renal tubuleinterstitial fibrosis,RIF)是各種原因引起的慢性腎臟病(chronic kidney disease,CKD)的共同通路和主要病理特征,腎間質(zhì)纖維化是由于細胞外基質(zhì)(extracelluar matirx,ECM)合成增加和降解減少的綜合結(jié)果。肌成纖維細胞(myofibroblast, MyoF)是腎間質(zhì)中產(chǎn)生ECM的主要細胞。最新研究認為,腎小管上皮細胞在病理
2、刺激下可發(fā)生上皮細胞-肌成纖維細胞轉(zhuǎn)分化(epithelial to mesenchymal transdifferentiation, EMT),喪失原有的細胞表型特征,表達α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA),呈現(xiàn) MyoF 的特征表型,成為腎間質(zhì)MyoF的主要來源。轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是TEMT的主要誘導因子,可單獨或通過其致腎纖維化作用的下游因子促使 TEMT的
3、發(fā)生。
目的:本實驗研究益腎化瘀方對 TGF-β1誘導的腎小管上皮細胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化的作用,以及對α-SMA、TGF-β1和纖維化抑制性因子Smad7表達的影響,探討益腎化瘀方對腎間質(zhì)纖維化防治作用的可能機制,為臨床上應用益腎化瘀方防治腎間質(zhì)纖維化提供理論依據(jù)。
方法:將體外培養(yǎng)的大鼠近端腎小管上皮細胞(NRK52E)以纈沙坦(代文)為陽性對照,分為:①正常對照組;②TGF-β1誘導組;③TGF-β1+益腎化瘀方低劑
4、量組;④TGF-β1+益腎化瘀方中劑量組;⑤TGF-β1+益腎化瘀方高劑量組;⑥TGF-β1+纈沙坦組。培養(yǎng) 48h后取出,應用實時熒光定量 PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR)技術(shù)和細胞免疫化學技術(shù)檢測細胞α-SMA、TGF-β1的mRNA及Smad7蛋白表達。每組后續(xù)相關(guān)實驗重復三次。
結(jié)果:①與正常對照組相比,TGF-β1刺激組細胞從鋪路石樣上皮細胞向
5、梭形肌成纖維細胞轉(zhuǎn)變,免疫細胞化學染色可見Samd7染色陽性細胞顯著減少;益腎化瘀方組細胞形態(tài)變化不顯著,益腎化瘀方大劑量組上述染色陽性細胞數(shù)量與正常對照組差別不明顯,代文組細胞變化與益腎化瘀方大劑量組相似。②與正常對照組相比,益腎化瘀方高劑量組α-SMA、 TGF-β1mRNA及Smad7蛋白的表達水平無顯著性差異(p>0.05);益腎化瘀方低、中、高劑量均能抑制TGF-β1誘導的TGF-β1、α-SMAmRNA 表達,上調(diào) Smad
6、7 蛋白的表達,且呈劑量依賴性。益腎化瘀方高劑量組TGF-β1、α-SMAmRNA的表達水平顯著低于TGF-β1刺激組(p<0.05),益腎化瘀方高劑量組TGF-β1、α-SMAmRNA表達與纈沙坦組比較無顯著性差異(p>0.05)。③相各治療組TGF-β1、α-SMAmRNA及Smad7蛋白的表達與TGF-β1刺激組差異顯著(p﹤0.05);且其抗 RIF 作用與中藥的劑量呈正相關(guān);纈沙坦組細胞變化與益腎化瘀方高劑量組相似。
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