黃芩苷對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中Smad3、Smad7表達(dá)的影響及意義.pdf

1、背景
　　 腎小管間質(zhì)纖維化(Renal Interstitial Fibrosis，RIF)是各種慢性腎臟病進(jìn)展至終末期腎病過(guò)程中必有和重要的表現(xiàn)。肌成纖維細(xì)胞(Myofibroblast，MF)的產(chǎn)生及其在腎間質(zhì)中的聚積和隨后發(fā)生的腎小管萎縮被認(rèn)為是RIF的核心因素。MF的來(lái)源一直備受矚目。近10年來(lái)，有關(guān)報(bào)道提出，腎小管上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithetlial mesenchymal transition，EMT)可能是

2、MF的主要來(lái)源之一。因此腎小管EMT在RIF發(fā)生發(fā)展中的作用日益受到重視。引起腎小管EMT的因素很多，包括損傷、炎癥和生長(zhǎng)因子等，其中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)在腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生EMT中的作用也越來(lái)越受到關(guān)注。中藥提取物黃芩苷(Baicalin)具有抗RIF、肺纖維化及肝纖維化的作用，其抗RIF的作用機(jī)制是否通過(guò)抑制腎小管EMT，需要進(jìn)一步研究。
　　 目的<

3、br>　　 本課題采用細(xì)胞培養(yǎng)的方法，體外觀察黃芩苷對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的人近端腎小管上皮細(xì)胞(human renal tubular epithelial cell，HK-2)轉(zhuǎn)分化作用的影響，探討黃芩苷抗RIF的可能作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用黃芩苷抗RIF提供理論依據(jù)。
　　 方法
　　 選取處于對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的HK-2細(xì)胞，分為6個(gè)試驗(yàn)組：(1)空白對(duì)照組：僅加入胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基；(2)TGF-β1誘導(dǎo)組：選擇5μg

4、/L TGF-β1作為有效誘導(dǎo)濃度；(3)干預(yù)組：5μg/L TGF-β1+40μmol/L黃芩苷；(4)干預(yù)組：5μg/LTGF-β1+80μmol/L黃芩苷；(5)干預(yù)組：5μg/L TGF-β1+160μmol/L黃芩苷；(6)干預(yù)組：5μg/L TGF-β1+320μmol/L黃芩苷?；诒菊n題前期研究證實(shí)，12 h后TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2即發(fā)生了形態(tài)學(xué)改變，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞改變?cè)矫黠@。故本實(shí)驗(yàn)選取培養(yǎng)72 h時(shí)的細(xì)胞

5、，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，并于24 h、48h、72 h時(shí)觀察細(xì)胞增殖情況；并利用RT-PCR法檢測(cè)培養(yǎng)72 h時(shí)的各組細(xì)胞表達(dá)Smad3 mRNA、Smad7 mRNA情況。
　　 結(jié)果
　　 1.空白對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)72 h時(shí)，細(xì)胞形狀呈方形或輕度多角形變，具有典型的鋪路石樣特征。TGF-β1誘導(dǎo)組表現(xiàn)為細(xì)胞拉長(zhǎng)、肥大，變長(zhǎng)梭形，細(xì)胞間隙變大，胞漿透明度下降，喪失了鋪路石樣生長(zhǎng)方式。黃芩苷各組細(xì)胞變形程度均輕于

6、TGF-β1誘導(dǎo)組，且隨著黃芩苷濃度的增加，細(xì)胞發(fā)生梭形變的程度逐漸減輕，當(dāng)黃芩苷濃度增加到320μmol/L時(shí)，HK-2細(xì)胞形態(tài)基本維持正常。
　　 2.5μg/LTGF-β1誘導(dǎo)組能顯著誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞增殖，并隨著時(shí)間延長(zhǎng)增殖能力逐漸增強(qiáng)，與空白對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)；用黃芩苷進(jìn)行干預(yù)后，其促細(xì)胞增殖作用受到顯著抑制，且各干預(yù)組隨著黃芩苷濃度的增加，抑制作用越明顯，但40μmol/L黃芩苷組抑制作用較弱，而1

7、60μmol/L、320μmol/L黃芩苷組細(xì)胞抑制作用基本相等。
　　 3.TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞培養(yǎng)72 h時(shí)，Smad3 mRNA的表達(dá)量明顯上升，Smad7mRNA則明顯下降。不同濃度黃芩苷進(jìn)行干預(yù)后，隨著黃芩苷濃度增加，細(xì)胞Smad3mRNA表達(dá)量逐漸降低，Smad7 mRNA表達(dá)量逐漸增加。40μmol/L黃芩苷組HK-2細(xì)胞Smad3 mRNA、Smad7 mRNA表達(dá)量更接近于TGF-β1誘導(dǎo)組。160μ

8、mol/L、320μmol/L黃芩苷組細(xì)胞Smad3 mRNA、Smad7 mRNA表達(dá)量更接近于空白對(duì)照組，但這兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論
　　 1.5μg/L TGF-β1可誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)化為長(zhǎng)梭形細(xì)胞，而黃芩苷可抑制這一改變。
　　 2.黃芩苷可抑制TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞增殖。
　　 3.黃芩苷抑制HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化作用與Smad7表達(dá)增高和Smad3表達(dá)降低有關(guān)。