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文檔簡介
1、目的:探討血小板反應(yīng)蛋白1(thrombospondin 1,TSP-1)及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在轉(zhuǎn)化生物因子β<,1>(TGF β<,1>)誘導(dǎo)人腎小管上皮-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(tubular epithelial-myofibrils transdifferentiation,TEMT)過程中的作用,闡明TSP-1與VEGF的關(guān)系,為防治腎間質(zhì)纖維化提供理
2、論依據(jù).方法:用無血清培養(yǎng)基體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細(xì)胞株(HKCs),實(shí)驗(yàn)分四組:①正常對(duì)照組(C組),又分為C1、C2和C3亞組;②TGFβ<,1>組(T組),加入TGFβ<,1>培養(yǎng),又分為T1、T2和T3亞組;③反義寡核苷酸組(TA組),加入TGFβ<,1>和TSP-1反義寡核苷酸培養(yǎng);④錯(cuò)義寡核苷酸組(TS組),加入TGFβ<,1>和TSP-1錯(cuò)義寡核苷酸培養(yǎng).分別于72小時(shí)后,用免疫組化檢測細(xì)胞角蛋白(CK)、a-平滑肌肌動(dòng)蛋
3、白(α-SMA)、VEGF、TSP-1的表達(dá),計(jì)算機(jī)圖像分析儀測定陽性細(xì)胞染色的平均光密度值(AOD)進(jìn)行比較分析.用半定量RT-PCR檢測VEGF mRNA和TSP-1 mRNA的表達(dá),以VEGF mRNA相對(duì)表達(dá)量及TSP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行比較分析.結(jié)論:1、HKCs發(fā)生TEMT后合成TSP-1增高,呈時(shí)間依賴性.2、TSP-1可抑制VEGF表達(dá).3、TSP-1反義寡核苷酸可抑制TGFβ<,1>誘導(dǎo)的TEMT,解除對(duì)VEG
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