葛根素對AngⅡ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)的影響及機(jī)制研究.pdf

1、組織因子(TF)是體內(nèi)生理性止血和病理性血栓形成中血液凝固的重要啟動因子。TF為分子量約47 kD的單鏈跨膜糖蛋白，既是FⅦ或激活的Ⅶ因子(FⅦa)的受體，又是FⅦa激活FⅩ和FⅨ的必需輔因子。新近大量研究顯示：人體內(nèi)還存在變拼(as)TF，它在體內(nèi)可能具有促凝與抗凝雙重作用；因發(fā)現(xiàn)不久，所以其確切的生物學(xué)和病理生理學(xué)意義尚待進(jìn)一步研究。 腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是人體內(nèi)最重要的體液調(diào)節(jié)系統(tǒng)之一，在維持人體正常組織功能和生

2、命活動中起著重要作用。許多研究顯示該系統(tǒng)中的血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)不僅具有升高血壓的作用，而且還可影響凝血系統(tǒng)、纖溶系統(tǒng)以及血小板的功能，參與動脈粥樣硬化和急性心肌梗死等與血栓形成有關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展。 葛根素(Pue)是從中藥葛根中分離提純出來的主要成份，臨床上廣泛用來防治血栓栓塞性疾病。有報(bào)道Pue具有細(xì)胞保護(hù)、抗氧自由基損傷等多種作用。但是Pue是否能影響AngⅡ誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)組織因子(TF)表達(dá)增加及其機(jī)制

3、尚未見報(bào)道。 研究目的: ①觀察AngⅡ?qū)θ四氺o脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVECs)TF表達(dá)的影響以及Pue對其的干預(yù)作用； ②探討Pue抑制AngⅡ誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞TF表達(dá)的作用機(jī)制。 方法：HUVECs培養(yǎng)采用DMEM完全培養(yǎng)基；MTT測細(xì)胞活力；一期凝固法測總的細(xì)胞促凝活性(PCA)；TF活性的鑒定用乏Ⅶ血漿和TF單克隆抗體。采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法(ELISA)法定量檢測TF抗原；采用RT-PCR的方

4、法檢測TF mRNA；免疫組織化學(xué)染色觀察NF-kB的變化。 結(jié)果: ①不同濃度的AngⅡ(10-10～10-6mol/l)促進(jìn)HUVECs細(xì)胞TF活性和mRNA的表達(dá)，并具有明顯的量效關(guān)系(r=0.9528)； ②單用Pue(62.5～500 mg/l)不能抑制HUVECs細(xì)胞的TF活性；在給予AngⅡ之前30 min用Pue(62.5～500 mg/l)預(yù)處理HUVECs細(xì)胞，Pue可呈劑量依賴式地抑制Ang

5、Ⅱ(10-7 mol/l)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)TF PCA,TF抗原和TFmRNA增加的作用，在500 mg/l時(shí)抑制作用達(dá)到最強(qiáng)；500 mg/l Pue抑制AngⅡ(10-7mol/l)對TF表達(dá)的刺激作用也呈時(shí)間依賴性，在12h抑制作用最強(qiáng)。 ③一氧化氮合酶(NOS)的抑制劑L-NAME可明顯地阻抑Pue拮抗AngⅡ促進(jìn)HUVECs TF PCA和TF mRNA的增加的作用。 ④免疫組織化學(xué)染色顯示HUVECs細(xì)胞經(jīng)A

6、ngⅡ處理45min后，細(xì)胞核內(nèi)NF-kB顆粒明顯增多，但經(jīng)Pue處理HUVECs細(xì)胞15min后，再加入AngⅡ作用45min，核內(nèi)棕黃色NF-kB顆粒則明顯減少。 結(jié)論: ①AngⅡ能誘導(dǎo)HUVECs表達(dá)TF，Pue具有在mRNA水平抑制AngⅡ刺激HUVECs TF表達(dá)的作用； ②NO途徑參與了Pue抑制AngⅡ誘導(dǎo)HUVECs TF表達(dá)的作用； ③Pue和AngⅡ可能通過影響NF-kB的活化來改變