白介素-6誘導血管內(nèi)皮細胞組織因子表達和川芎嗪的抑制效應.pdf

1、許多研究表明，體內(nèi)存在一個炎癥-凝血網(wǎng)絡。促炎介質(zhì)(TNFα、IL-6等)既引起炎癥反應，又促進凝血過程，二者均屬于防衛(wèi)反應的重要組成部分。血液凝固過程中的絲氨酸蛋白酶不僅參與凝血因子的激活，還可導致一系列細胞反應，特別是通過特定的受體參與炎癥反應。在這些反應過程中，激活的血管內(nèi)皮細胞(VEC)表面表達的組織因子(TF)可能是炎癥和血栓形成之間重要的銜接物。 靜息狀態(tài)下，VEC通過嚴格控制凝血系統(tǒng)與抗凝系統(tǒng)之間的平衡來調(diào)節(jié)生理性

2、止血。TF在VEC、單核細胞中的促凝活性具有非常重要的生物學意義。TF是一種跨膜糖蛋白，可與FVII、FVIIa結合形成復合物，并加速FVII成為FVIIa。實驗證明，TF的表達與許多疾病的血栓形成密切相關，包括敗血癥、DIC、動脈粥樣硬化、心腦血管血栓性事件(如心肌梗死和腦梗塞等)。 白介素-6(IL-6)作為體內(nèi)主要的炎癥因子之一，有著廣泛的生物學活性，在機體受到創(chuàng)傷和感染時所產(chǎn)生的急性期反應中，發(fā)揮著中樞性的協(xié)調(diào)作用。在多

3、種嚴重感染性疾病和心血管事件中，血漿IL-6濃度顯著升高，而且IL-6濃度升高水平和死亡率間存在著正相關關系。在動脈粥樣硬化和急性冠脈綜合征等疾病的發(fā)生中起著和腫瘤壞死因子α-樣重要的作用。IL-6的生物學作用是通過和IL-6受體結合來完成的。由于VEC膜上缺乏IL-6受體，因此長期以來VEC表達TF和IL-6的關系缺乏報道。新近發(fā)現(xiàn)IL-6可和血漿中可溶性IL-6受體(sIL-6R)結合，而后該復合物通過和gp-130進行信號轉導，這

4、為研究IL-6對VEC表達TF提供了可能性。但這一假設有待事實證明。 IL-6在體內(nèi)生物作用廣泛，對多種細胞具有調(diào)控作用。根據(jù)已有資料，它在細胞內(nèi)的信號轉導主要涉及JAK激酶／信號轉導和轉錄激活因子(JAK2／STAT3)和絲裂原活化蛋白激酶(Ras／MAPK)，不同細胞可能各有側重。其次，大量實驗提示在TF表達調(diào)控中，蛋白激酶C(PKC)途徑起著關鍵作用，并且也有報道PKC途徑也參與了IL-6的生物學作用，同時不同信號轉導途

5、徑之間可能存在網(wǎng)絡關系。因此，如果IL-6的確可以調(diào)控VEC的TF表達，那么它的信號途徑究竟如何?這也是本研究必須回答的問題。 由于IL-6參與許多疾病的發(fā)病學過程，所以，探索針對IL-6的干預措施，對于發(fā)病學和臨床防治均有重要的啟示意義。祖國醫(yī)學是一個偉大寶庫。已有資料表明川芎具有顯著的活血化瘀作用，其主要有效成分是川芎嗪(TMP)。本室業(yè)已報道TMP能明顯抑制凝血酶誘導的單個核細胞-血小板的聚集反應。新近工作提示，在白細胞

6、-血小板反應引起炎癥與凝血過程中，TF表達起著關鍵作用。因此，TMP是否對IL-6誘導VEC表達TF也具有抑制作用，這是值得試探的重要工作。 目的:基于上述設想，本研究的主要內(nèi)容包括：①確定IL-6和可溶性的IL-6受體結合后形成的復合物能否結合于VEC上；②觀察促炎性細胞因子IL-6對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞株組織因子(TF)表達的影響；③探討IL-6誘導VEC表達TF的信號轉導途徑；④觀察TMP對IL-6誘導VEC表達TF的影

7、響。 方法:ECV304培養(yǎng)采用RPMI-1640完全培養(yǎng)基；免疫熒光法觀察工L一6／可溶性IL-6受體復合物和VEC的結合；常規(guī)生化方法檢測上清液中LDH含量；MTT法觀察細胞活力；電子顯微鏡觀察細胞超微結構的改變；用DEGR-VIIa(TF特異性阻斷劑)生物活性法和抗TF單克隆抗體法確認TF活性；一期凝固法測總的細胞促凝活性(PCA)；細胞TF抗原測定采用ELISA法；TF mRNA采用RT-PCR的方法檢測。以特異性阻斷