血管內(nèi)皮抑制因子thrombospondin-1對淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞生成的影響.pdf

1、目的：探討血小板反應(yīng)素-1(thrombospondin-1，TSP-1)對淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和游走的影響及作用機(jī)制，旨在找到安全、有效、實用的淋巴管生成抑制劑。 材料和方法：實驗所用的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞取自健康豬的胸導(dǎo)管。1 淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及傳代。2 細(xì)胞鑒定實驗：本實驗采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法，應(yīng)用第Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫熒光法和淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗體血管內(nèi)皮生長因子受體3 (vascular endothelial g

2、rowth factorreceptor-3，VEGFR-3)對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行聯(lián)合鑒定。3抑制實驗：本實驗采用劃線法和MTT 法觀察血小板反應(yīng)素-1 對淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和游走的影響。(1)劃線法：包括對照組和3種濃度的實驗組。(2)MTT法：包括對照組和5種濃度的實驗組。 結(jié)果：1、淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定：經(jīng)第Ⅷ因子和VEGFR-3 對培養(yǎng)的細(xì)胞聯(lián)合鑒定，為典型淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞。2、光鏡觀察：光鏡下淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞呈特征性“鵝卵石狀

3、”或“鋪路石狀"鑲嵌排列。3、劃線法：與對照組相比，當(dāng)TSP-1 的濃度達(dá)到1.0ug/ml時，對淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和游走都有明顯的抑制作用(P<0.01)。4、MTT法：當(dāng) TSP-1 的濃度達(dá)到0.8ug/ml時，兩者對內(nèi)皮細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用(P<0.01)。 結(jié)論：1、使用本實驗方法培養(yǎng)的細(xì)胞為典型的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，而且能穩(wěn)定地保持其生物學(xué)特征。2、Ⅷ因子和VEGFR-3 聯(lián)合鑒定法是鑒定淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的一種可