色素上皮源性因子對(duì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞生成的影響.pdf

1、目的:建立穩(wěn)定可行的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)和鑒定方法。探討色素上皮源性因子(Pigmentepithelitun-derivedfactor，PEDF)對(duì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和游走的影響。旨在尋找安全、實(shí)用、有效的淋巴管生成抑制劑。 材料和方法:取健康豬的胸導(dǎo)管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)。1.淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及傳代。2.光鏡、電鏡觀察淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)特征。3.細(xì)胞鑒定實(shí)驗(yàn)：采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法，應(yīng)

2、用第Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫熒光法和淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞透明質(zhì)酸受體-1(LYVE-1)抗體對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行聯(lián)合鑒定。4.抑制實(shí)驗(yàn)：采用劃線法和。MTT法觀察色素上皮源性因子對(duì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的影響。 結(jié)果: 1.光鏡下淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞呈特征性“鵝卵石狀”或“鋪路石狀”鑲嵌排列，并有接觸抑制現(xiàn)象。 2.透射電鏡可見內(nèi)皮細(xì)胞呈卵圓形、多角形或不規(guī)則形，胞核大，胞質(zhì)中含有大量小泡。 3.經(jīng)第Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫熒光鑒

3、定，內(nèi)皮細(xì)胞的胞質(zhì)中出現(xiàn)黃綠色顆粒；經(jīng)LYVE-1抗體標(biāo)記，內(nèi)皮細(xì)胞呈綠色，為典型淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞。 4.劃線法：與對(duì)照組相比，當(dāng)PEDF的濃度≥30ng/ml時(shí)，對(duì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和游走都有明顯的抑制作用(P＜0.01)。5.MTT法：當(dāng)PEDF的濃度＞25ng/ml時(shí)，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用(P＜0.01)。 結(jié)論： 1.建立了穩(wěn)定可行的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法。 2.采用以第Ⅷ因子