LOX-1在C反應蛋白誘導人臍靜脈內皮細胞組織因子表達中的作用.pdf

1、目的：目前C反應蛋白(CRP)被認為是一種獨立、強烈的心血管疾病危險因素，C反應蛋白能上調血管內皮細胞組織因子(TF)基因的表達。我們研究凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)在C反應蛋白誘導人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)組織因子表達中的作用，以探討CRP在動脈血栓形成中可能的作用的。
　　方法：構建人重組質粒pTracer CMV2-CRP并將其轉染HUVECs細胞，RT-PCR、Western blot法鑒定CRP

2、在HUVECs中轉錄水平及蛋白水平的表達。再用質粒pTracer CMV2-CRP轉染HUVECs細胞，分正常對照組、空質粒GFP組和CRP-GFP組(n=3)，RT-PCR檢測LOX-1、TF的mRNA表達，Western blot檢測各組LOX-1、TF、P-ERK1/2、T-ERK1/2、P-JNK、T-JNK蛋白表達。CRP-GFP組分別加LOX-1阻斷劑、ERK1/2阻斷劑(U0126)、3NK阻斷劑(SP600125)，We

3、stern blot檢測TF蛋白。
　　結果：在CRP質粒轉染的HUVEC細胞中發(fā)現(xiàn)綠色熒光蛋白及檢測到CRP的mRNA和蛋白表達。用表達人CRP的質粒轉染HUVECs顯著增加LOX-1mRNA和蛋白表達(0.70±0.03 vs 0.24±0.01，0.6616±0.0200 vs 0.2558±0.0400，P<0.05)、TF的mRNA和蛋白表達(0.442±0.04 Ovs 0.146±0.030，0.7274±0.020

4、0 vs 0.2174±0.0200，P<0.05)。CRP激活了ERK1/2 MAPK，未激活JNK MAPK。CRP上調TF表達被ERK1/2阻斷劑而非JNK阻斷劑阻斷.抗LOX-1的中和抗體顯著減少CRP誘導的TFmRNA和蛋白表達(0.264±0.030 vs 0.442±0.040，0.3244±0.0400 vs 0.7274±0.0200，P<0.05)。
　　結論：構建的重組質粒成功轉染HUVEC細胞，CRP基因在