脂聯(lián)素對高糖誘導血管內皮細胞LOX-1表達的調控作用研究.pdf

1、目的：研究脂肪細胞因子脂聯(lián)素（APN）對高糖誘導血管內皮細胞凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1（LOX-1）表達的影響及其機制，為2型糖尿病患者大血管病變的預防和治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　?。?）不同濃度D-葡萄糖(0、15、30、60mmol/L)作用于人臍靜脈內皮細胞株（HUVEC-12）48h后，倒置相差顯微鏡觀察內皮細胞形態(tài)，Western Blotting檢測HUVEC-12中 LOX-1的蛋白表達，篩選最

2、佳葡萄糖濃度用于構建高糖誘導的內皮細胞受損模型。
　?。?）用濃度30mmol/LD-葡萄糖作用于HUVEC-12不同時間（0、12、24、48、72h）后，倒置相差顯微鏡觀察內皮細胞形態(tài)，Western Blotting檢測HUVEC-12中LOX-1的蛋白表達，篩選最佳葡萄糖作用時間用于建模。
　　（3）選取30mmol/L D-葡萄糖作用于HUVEC-1248h，造成D-葡萄糖誘導的HUVEC-12內皮功能受損模型；然

3、后，不同濃度的APN（0、10、20、40μg/m l）作用于D-葡萄糖誘導的HUVEC-1248h，倒置相差顯微鏡觀察內皮細胞形態(tài)，Western Blotting檢測磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶1/2(p-ERK1/2)、核轉錄因子（NF）－κB和LOX-1蛋白表達，同時，篩選最佳保護作用的APN濃度。
　?。?）選取20μg/m l APN作用于D-葡萄糖誘導的HUVEC-12不同時間（0、12、24、48、72h）后，倒置相差

4、顯微鏡觀察內皮細胞形態(tài)，Western Blotting檢測HUVEC-12中p-ERK1/2、NF－κB和LOX-1蛋白表達。同時，篩選最佳保護作用的APN作用時間。
　　（5）在20μg/ml APN作用48h后的D-葡萄糖誘導的HUVEC-12中使用ERK1/2阻斷劑PD98059（50umol/l）干預，用Western Blotting檢測HUVEC-12中p-ERK1/2、NF－κB和LOX-1蛋白表達,用間接免疫熒光

5、法檢測其核轉錄因子－κB亞基p65（NF－κB-p65）核轉位情況。
　　結果：
　　（1）不同濃度的D-葡萄糖誘導HUVEC-12不同時間，鏡下見內皮細胞排列較為紊亂,折光性變弱，細胞核模糊，細胞間隙明顯增大，細胞內顆粒狀物增多；D-葡萄糖誘導的HUVEC-12中LOX-1蛋白表達均上調，其中，30mmol/L D-葡萄糖作用于HUVEC-1248h，內皮細胞形態(tài)改變和LOX-1蛋白表達上調最明顯。
　?。?）不同濃

6、度APN作用于D-葡萄糖誘導的HUVEC-12不同時間，鏡下見內皮細胞形態(tài)改善，折光性有所增強，胞內顆粒物減少，細胞排列相對規(guī)整；同時，APN可使D-葡萄糖誘導的HUVEC-12內LOX-1蛋白表達下調，NF－κB表達降低，ERK1/2磷酸化水平增強；其中20μg/ml APN作用于D-葡萄糖誘導的HUVEC-1248h后，作用最明顯。
　?。?）ERK阻斷劑PD98059和APN聯(lián)合干預下的D-葡萄糖誘導的HUVEC-12中ER