替米沙坦對脂多糖刺激脂肪細胞分泌細胞因子和相關炎癥通路的影響.pdf

1、研究背景:高血壓、糖尿病、脂質(zhì)代謝紊亂和肥胖常常簇集出現(xiàn)而形成代謝綜合征，嚴重影響公眾的健康水平，微炎癥反應在其中發(fā)揮了重要的作用。腎素-血管緊張素(RAS)系統(tǒng)除了血流動力學作用外，還促進微炎癥反應。阻斷RAS系統(tǒng)，對上述疾病具有一定的保護作用。RAS系統(tǒng)組分也存在于脂肪組織和脂肪細胞中，因此脂肪組織和脂肪細胞可能成為血管緊張素受體拮抗劑(ARBs)的作用靶點。
　　目的:研究血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑替米沙坦對脂多糖(LPS)刺激

2、脂肪細胞分泌白細胞介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子a(TNF-a)、脂聯(lián)素及三者mRNA表達的影響，并深入探討替米沙坦對脂肪細胞NF-кB通路和MAPK通路相關蛋白NF-кBp65、p-IкBa、IкBa、P-ERK1/2、ERK1/2、p-p38MAPK、p38MAPK、p-JNK和JNK滾達的影響。
　　方法:將培養(yǎng)成熟的脂肪細胞隨機分為6組：對照組，LPS(1μg/ml)組，LPS+替米沙坦0.01μg/ml，0.1μg/m

3、l，1μg/ml和10μg/ml。對照組加DMSO，LPS+替米沙坦組加入不同濃度替米沙坦，孵育2h后，LPS組和LPS+替米沙坦組再加入脂多糖(1μg/ml)孵育1h。細胞經(jīng)上述處理后，提取細胞上清和細胞總RNA，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和實時定量聚合酶聯(lián)反應(Q-PCR)分別檢測各組TNF-a、IL-6和脂聯(lián)素的蛋白分泌水平及mRNA基因表達的差異。收集細胞，提取核蛋白和總蛋白，用Western免疫印跡法檢測各組核蛋白NF-к

4、 Bp65、總蛋白p-Iк Ba、Iк Ba、p-ERK1/2、ERK1/2、p-p38MAPK、p38MAPK、p-JNK和JNK的表達，比較各組NF-к Bp65核轉(zhuǎn)位以及其它蛋白磷酸化水平的差異。
　　結果:與對照組相比，脂多糖刺激可使IL-6分泌升高2.7倍，mRNA表達升高4倍，替米沙坦干預后IL-6分泌及其mRNA表達均隨替米沙坦?jié)舛壬叱氏陆第厔荩渲凶畲髣┝刻婷咨程?10μg/ml)干預后，IL-6分泌水平和mRN

5、A表達分別下降約63％和67％。TNF-a分泌及其mRNA表達也隨替米沙坦?jié)舛壬叱氏陆?，與對照組相比，脂多糖刺激使TNF-a分泌升高約1.3倍，mRNA表達升高約3.5倍，最大劑量替米沙坦(10μg/ml)干預后，TNF-a分泌水平下降23％，mRNA表達下降86％。較之對照組，大劑量替米沙坦可使脂聯(lián)素的分泌及mRNA表達升高，而脂多糖對脂肪細胞脂聯(lián)素的分泌和mRNA表達沒有影響。脂多糖刺激后脂肪細胞胞漿內(nèi)Iк Ba磷酸化蛋白表達增強

6、，NF-к Bp65蛋白核轉(zhuǎn)位增加，胞核P]NF-к Bp65蛋白表達增多，MAPK通路相關蛋白ERK1/2磷酸化和p38MAPK磷酸化水平也增強，而JNK蛋白磷酸化未檢測到。10μg/ml替米沙坦干預后，NF-к Bp65蛋白核轉(zhuǎn)位受抑制，核蛋白NF-к Bp65表達減少，Iк Bα磷酸化表達也減少，MAPK通路蛋白ERK1/2磷酸化表達和p38MAPK磷酸化表達均減少。
　　結論:替米沙坦能通過直接影響脂肪細胞炎性因子的分泌而