腫瘤壞死因子-α對(duì)脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素和炎癥因子mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]大量研究發(fā)現(xiàn)肥胖患者和2型糖尿病(T2DM)人群血漿中TNF-α水平明顯升高,因此肥胖和2型糖尿病被認(rèn)為是一種慢性低度的炎癥狀態(tài)。過度表達(dá)的TNF-α在胰島素抵抗中被認(rèn)為發(fā)揮了中心介質(zhì)的作用,但是其導(dǎo)致胰島素抵抗的分子機(jī)制目前尚不清楚。本研究利用高濃度腫瘤壞死因子(TNF-α)處理3T3-L1脂肪細(xì)胞系,模擬低度的炎癥狀態(tài)下的脂肪細(xì)胞,觀察成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞的脂聯(lián)素(ADPN)mRNA、過氧化物酶體增殖體激活受體-γ(PP

2、AR-γ)mRNA、TNF-αmRNA、白細(xì)胞介素-6(IL-6)mRNA和白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)mRNA表達(dá)的變化,探討TNF-α在炎癥-胰島素抵抗(IR)-2型糖尿病(T2DM)過程中的作用。
　　 [方法](1)培養(yǎng)前脂肪細(xì)胞3T3-L1細(xì)胞,并觀察其誘導(dǎo)分化成熟過程中過氧化物酶體增殖活化受體-Y(PPAR-γ)mRNA、脂聯(lián)素(ADPN)mRNA的表達(dá)情況。(2)以高濃度(20μg/L)的TNF-α處理分化成熟的

3、脂肪細(xì)胞0.5、4、8、24h,提取總RNA,采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)ADPNmRNA、PPAR-γmRNA、TNF-αmRNA、白細(xì)胞介素(IL)-6mRNA、IL-1βmRNA的表達(dá)情況。
　　 [結(jié)果](1)3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中ADPNmRNA的表達(dá)呈逐漸上升趨勢(shì),誘導(dǎo)后PPAR-γmRNA增加。(2)以高濃度TNF-α處理0.5h后PPAR-γmRNA表達(dá)水平并未出現(xiàn)明顯下降,4、8、24h時(shí)均低于對(duì)

4、照組(P<0.01),4h時(shí)降至最低。分化成熟的脂肪細(xì)胞中ADPNmRNA表達(dá)水平在TNF-α處理0.5、4、8h后隨著時(shí)間延長逐漸下降,8h時(shí)降至最低(P<0.01)。TNF-α處理0.5h后TNF-αmRNA表達(dá)水平明顯上升,并于4h時(shí)達(dá)峰值,各處理組均高于對(duì)照組(P<0.01)；0.5h后IL-6mRNA表達(dá)水平明顯升高,各處理組均高于對(duì)照組(P<0.01)?？瞻捉M、對(duì)照組和各TNF-α處理組IL-1βmRNA的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義(P>0.05)。
　　 [結(jié)論]前脂肪細(xì)胞3T3-L1細(xì)胞系在誘導(dǎo)成熟過程中,PPAR-γmRNA和ADPNmRNA表達(dá)水平隨著誘導(dǎo)過程逐漸升高；TNF-α處理可以使成熟脂肪細(xì)胞炎癥因子TNF-αmRNA和IL-6mRNA表達(dá)水平升高；TNF-α處理可以使成熟脂肪細(xì)胞PPAR-γmRNA和ADPNmRNA表達(dá)水平下降,并呈時(shí)間依賴性。本實(shí)驗(yàn)從分子生物學(xué)水平研究2型糖尿病的炎癥假說,TNF-α參與了炎癥-IR-T2DM的過程。