腫瘤壞死因子受體基因轉移增強新型腫瘤壞死因子對血管內皮細胞殺傷作用的實驗研究.pdf

1、山東大學博士學位論文腫瘤壞死因子受體基因轉移增強新型腫瘤壞死因子對血管內皮細胞殺傷作用的實驗研究姓名：孫曉文申請學位級別：博士專業(yè)：泌尿外科指導教師：許純孝2001.4.18腫瘤壞死因子受體基因轉移增強新型腫瘤壞死園子對血管內皮細胞殺傷作用的實驗研究腫瘤組織特別是實體腫瘤在生長過程中，' - 3 其直徑超過2 毫米時，必須有新生血管生成為其提供生長所需的營養(yǎng)，因此腫瘤快速生長擴展的一個必要條件就是大量新生血管的生成。有許多觀察和

2、實驗已經(jīng)證明，腫瘤組織中的新生血管密度高于良性增生組織和正常組織。血管內皮細胞在正常的生理條件下是處于相對靜止狀態(tài)的，只有在創(chuàng)傷修復、月經(jīng)等過程中才有新血管的生成。因此，正常人體組織與腫瘤組織的區(qū)別之一就是腫瘤組織中有大量新生血管，破壞或殺傷新生血管可抑制腫瘤。有實驗證明，將免疫毒素向瘤內注射后，造成腫瘤血管阻塞，抑制了腫瘤的成長。故新生血管成為腫瘤基因治療的很好的靶組織。眾所周知，新生血借是由不斷分裂的內皮細胞產(chǎn)生的，如果能夠抑制或根

3、本阻斷內皮細胞在腫瘤組織中的分裂，就能夠抑制或阻斷新生血管的生成，腫瘤細胞得不到必要的營養(yǎng)，也就不能生長擴展?；谏鲜隼碚摶A，I ‘本研究擬通過改造基因治療中常用的逆轉錄病毒載體p L X S N ，構建能使目的基因( T N F R ) 在目的細胞中特異表達的病毒載體，利用基因轉移的方法，實現(xiàn)T N F R 在目的細胞一一血管內皮細胞表面的特異表達，從而提高特定細胞表面T N F R 的表達數(shù)量，增強T N F 對血管內皮細胞的殺傷

4、作用。f 材料與方法 質粒p B l u e s c r i p t —K D R p —T N F 旺D 1 l a 和p L x s N D 2 9 9 一K D R p —T N F o cD 1 l a ( 含有編碼血管內皮細胞生長因子受體K D R 的啟動子K D R p 的c I ) N A 序列) ，p u t l 8 - T N F R 5 5 和p U C l 8 一T N F R 7 5 ( 分別含有編碼腫瘤壞死因子

5、受體T N F R 5 5 和T N F R 7 5 的c D N A序列) 由空軍總醫(yī)院分子生物學研究中心構建并保存。逆轉錄病毒載體p L X S N 、大腸桿菌菌株E c o l i ．D H 5 o 【A m p 一購于I n v i t r o g e n 公司。P A 3 17 逆轉錄病毒包裝細胞系、N I H 3 T 3 鼠成纖維細胞系、E C V 3 0 4 血管內皮細胞系購自軍事醫(yī)學科學院，空軍總醫(yī)院分子生物學研究中心保