新生血管內(nèi)皮細(xì)胞靶向性重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子的研制.pdf

1、由該科室構(gòu)建的重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子(rmhTNF)具有高效低毒的優(yōu)點(diǎn),已經(jīng)SFDA批準(zhǔn)聯(lián)合化療藥物用于晚期肺癌的治療,但是仍需要較大的劑量.為了進(jìn)一步提高rmhTNF的療效,降低毒副作用,同時(shí)降低用量,我們將RGD肽融合在rmhTNF的N末端,構(gòu)建了RGD4C-rmhTNF,希望該融合蛋白能夠特異性的作用于腫瘤新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞,改變內(nèi)皮細(xì)胞的屏障功能,與化療藥物協(xié)同作用,以更好的殺死腫瘤細(xì)胞.國內(nèi)外至今未見RGD肽與rmhTNF融合

2、蛋白的相關(guān)報(bào)道.1.RGD4C-rmhTNF重組蛋白的實(shí)驗(yàn)室研究該研究首先采用DNA重組技術(shù)正確構(gòu)建了含RGD4C-rmhTNF的融合基因的原核表達(dá)載體pBV-RGD4C-rmhTNF,含該表達(dá)載體的E.coli DH5α經(jīng)溫度誘導(dǎo)后可以以可溶性形式表達(dá)重組蛋白RGD4C-rmhTNF,表達(dá)量占菌體可染蛋白的7％左右,與抗TNF單抗可以特異性結(jié)合.2.RGD4C-rmhTNF的中試工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究在證實(shí)重組蛋白RGD4C-rmhTNF

3、具有生物學(xué)活性后,為了獲得足夠的樣品進(jìn)一步研究其在體內(nèi)外的抑瘤活性,我們對發(fā)酵和純化工藝進(jìn)行了放大,純化了兩批RGD4C-rmhTNF,得到高度純化的RGD4C-rmhTNF 93.92mg和115.7mg,活性回收率分別為91.43%和95.59%,目的蛋白純化倍數(shù)分別為26.15倍和22.64倍.通過對重組蛋白結(jié)構(gòu)、純度、生物學(xué)活性和殘留雜質(zhì)等幾個(gè)方面的控制,確認(rèn)所得到的重組蛋白符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求,并建立了重組蛋白制造與檢定規(guī)程和質(zhì)量

4、標(biāo)準(zhǔn).3、RGD4C-rmhTNF體內(nèi)外抑瘤活性及其作用機(jī)理研究用小鼠皮下移植瘤模型,觀察了低劑量RGD4C-rmhTNF單用對腫瘤生長的影響及與阿霉素的協(xié)同作用,同時(shí)和rmhTNF進(jìn)行了比較.研究結(jié)果表明,10000~250000 U/kg rmhTNF和RGD4C-rmhTNF隔日1次肌肉內(nèi)注射,共6次,對S1 80小鼠皮下移植瘤生長無明顯影響.5000~500000 U/kgrmhTNF和阿霉素聯(lián)合應(yīng)用,對阿霉素抗S180和H22