注射用重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子(rmh-TNF)發(fā)酵生產(chǎn)工藝的優(yōu)化.pdf_第1頁(yè)
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1、rmh-TNF工程菌經(jīng)全面檢定,確認(rèn)構(gòu)建正確,目的蛋白占菌體總蛋白的百分含量大于30％,菌種保持穩(wěn)定,完全符合大腸桿菌特征,該菌適用工程菌菌庫(kù)。
　　根據(jù)rmh-TNF的表達(dá),使用單因素法對(duì)由rmh-TNF在大腸桿菌中表達(dá)時(shí)的誘導(dǎo)時(shí)機(jī)、誘導(dǎo)維持時(shí)間、pH值、溶解氧等進(jìn)行了研究,選擇出較好的發(fā)酵工藝參數(shù),確定最佳誘導(dǎo)時(shí)機(jī)為OD值0.8-1.0,誘導(dǎo)維持時(shí)長(zhǎng)為3.5小時(shí),pH值在6.8-7.0,溶解氧維持在大于40%。
　　根據(jù)

2、rmh-TNF代謝特點(diǎn),優(yōu)化發(fā)酵補(bǔ)料培養(yǎng)基,利用多因素、多水平正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)研究了補(bǔ)料培養(yǎng)基配方中碳源氮源比例對(duì)發(fā)酵水平的影響,根據(jù)發(fā)酵結(jié)果得到補(bǔ)料培養(yǎng)基配方:100克胰蛋白胨、50克酵母提取物。
　　通過(guò)對(duì)補(bǔ)料工藝的研究,確定了注射用重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子發(fā)酵罐發(fā)酵開(kāi)始誘導(dǎo)后高溫滅菌的補(bǔ)料培養(yǎng)基以流加的方式對(duì)發(fā)酵罐進(jìn)行補(bǔ)加的新補(bǔ)料工藝。
　　結(jié)果表明:采用優(yōu)化補(bǔ)料工藝后使 rmh-TNF占菌體干重比例平均保持在255.8 m

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