替米沙坦對NAFLD大鼠肝臟脂肪含量和炎癥的影響.pdf

1、目的：
　　觀察替米沙坦對高糖高脂喂養(yǎng)的非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝臟脂肪含量和炎癥的影響，探討替米沙坦對肝臟的保護(hù)機(jī)制。
　　方法：
　　1.制備動物模型：選取6-8周齡的SPF級健康雄性SD大鼠34只，經(jīng)過1周的適應(yīng)性喂養(yǎng)后隨機(jī)分成兩組：正常對照組（n=8只），給予普通飼料喂養(yǎng)36周；NAFLD模型組（n=26只），給予高糖高脂膳食（配方：70％普通飼料+20%豬油+10%蔗糖+1%膽固醇+0.25%膽酸

2、）喂養(yǎng)36周。實(shí)驗(yàn)動物均自由進(jìn)食及飲水。于第24周末將NAFLD模型組隨機(jī)取2只大鼠行肝組織病理學(xué)檢查確定造模成功。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組：NAFLD模型組于造模成功后再隨機(jī)分為三個亞組觀察12周：NAFLD模型組（n=8）：繼續(xù)給予高糖高脂飲食喂養(yǎng)12周；替米沙坦干預(yù)組（n=8）：給予高糖高脂飲食及替米沙坦5mg/（kg·d）灌胃干預(yù)12周；生理鹽水對照組（n=8），給予高糖高脂飲食及等體積生理鹽水灌胃干預(yù)12周。
　　3.大

3、鼠體重、肝濕重和肝指數(shù)的變化：每4周測量并記錄大鼠體重。于第36周末觀察大鼠一般情況，測量體重。處死大鼠后使用電子天平稱取肝濕重，并計算肝指數(shù)：肝指數(shù)=[肝濕重(g)/體重(g)]×100%。
　　4.檢測血清ALT：烏拉坦麻醉后，經(jīng)腹主動脈采血。取血清樣本，應(yīng)用半自動血清生化分析儀檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）等生化指標(biāo)。
　　5.肝組織病理學(xué)檢查：取肝右葉組織做病理石蠟切片，經(jīng)蘇木精一伊紅（HE）染色，行肝組織病理學(xué)檢查

4、并進(jìn)行NAS積分評價。
　　6.NF-κB蛋白表達(dá)測定：用Western Blot方法測定肝組織中NF-κB蛋白表達(dá)水平并進(jìn)行量化分析。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠體重、肝濕重和肝指數(shù)的變化：
　　36周末，與正常對照組相比，NAFLD模型組、生理鹽水對照組及替米沙坦干預(yù)組體重均顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與NAFLD模型組相比，生理鹽水對照組體重?zé)o明顯變化；與生理鹽水對照組相比，替米沙坦干預(yù)組體重

5、顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。與正常對照組相比，NAFLD模型組、生理鹽水對照組及替米沙坦干預(yù)組肝濕重及肝指數(shù)均顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與NAFLD模型組相比，生理鹽水對照組肝濕重及肝指數(shù)均無明顯變化；與生理鹽水對照組相比，替米沙坦干預(yù)組肝濕重及肝指數(shù)有下降趨勢，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.肝功指標(biāo)的變化：
　　干預(yù)12周后，與正常對照組（38.33±6.98U/L）相比，NAFLD模型組（

6、87.83±12.06U/L）、生理鹽水對照組（86.50±13.41U/L）及替米沙坦干預(yù)組（60.50±17.80U/L）ALT均顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與NAFLD模型組相比，生理鹽水對照組ALT無明顯變化；與生理鹽水對照組相比，替米沙坦干預(yù)組ALT顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　3.肝組織病理學(xué)檢查：
　　干預(yù)12周后，與正常對照組相比，NAFLD模型組及生理鹽水對照組大鼠肝組織

7、HE染色結(jié)果均可見彌漫性的脂肪變性，細(xì)胞核位于邊緣，細(xì)胞多呈空泡狀，體積顯著增大，胞漿內(nèi)可見中、大泡性的脂滴沉積，氣球樣變多見，胞質(zhì)疏松，肝小葉和匯管區(qū)大量炎細(xì)胞浸潤，點(diǎn)狀壞死灶明顯，NAS積分升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。與生理鹽水對照組相比，替米沙坦干預(yù)組肝組織HE染色結(jié)果可見肝細(xì)胞體積減小，脂滴體積變小，以小、中泡性的脂滴為主，氣球樣變及小葉內(nèi)炎癥均明顯改善，NAS積分下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　

8、4.NF-κB蛋白表達(dá)水平的比較：
　　干預(yù)12周后，與正常對照組（18.53±2.51）相比，NAFLD模型組（86.67±11.57）、生理鹽水對照組（85.50±12.96）及替米沙坦干預(yù)組（61.00±10.20）NF-κB蛋白的表達(dá)均顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與NAFLD模型組相比，生理鹽水對照組NF-κB蛋白的表達(dá)無明顯變化；與生理鹽水對照組相比，替米沙坦干預(yù)組NF-κB蛋白的表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計