替米沙坦對長期HSHF膳食喂養(yǎng)大鼠肝臟巨噬細胞極化狀態(tài)的影響.pdf

1、目的：
　　1.觀察替米沙坦對長期高糖高脂（high sugar and high fat,HSHF）膳食喂養(yǎng)大鼠空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰島素（fasting insulin,FINS）及穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)的影響。
　　2.觀察替米沙坦對長期HSHF膳食喂

2、養(yǎng)大鼠肝臟病理形態(tài)及其內(nèi)巨噬細胞極化狀態(tài)的影響，探討替米沙坦改善長期HSHF喂養(yǎng)大鼠胰島素抵抗的機制。
　　方法：
　　將購自中國人民解放軍軍事科學院實驗動物中心的6-8周齡健康雄性 SD（Sprague Dawley）大鼠30只適應性喂養(yǎng)1周后隨機分成兩組：對照組10只，高糖高脂組20只。對照組飼以山西醫(yī)科大學動物實驗中心的普通飼料；高糖高脂組飼以課題組多項研究已經(jīng)使用過的高糖高脂飼料，飼料配方如下：70％普通飼料（面料，

3、由山西醫(yī)科大學動物實驗中心提供）+20%豬油+10%蔗糖+1%膽固醇+0.25%膽酸。兩組大鼠均在天黑前投食并自由飲水。飼養(yǎng)至第6個月時將HSHF組中存活的20只再隨機分為2個亞組：HSHF組10只，替米沙坦組10只。HSHF組繼續(xù)用上述高糖高脂飲食喂養(yǎng)；替米沙坦組接受上述高糖高脂飲食喂養(yǎng)的同時予以替米沙坦5mg/kg.d灌胃。將對照組、HSHF組、替米沙坦組繼續(xù)喂養(yǎng)3個月后，三組分別存活9只、8只、9只，隨機選取三組中存活大鼠各6只，

4、禁食8-12小時后測定大鼠體重，經(jīng)腹腔注射烏拉坦（4ml/kg）麻醉，待大鼠麻醉后打開腹腔，經(jīng)腹主動脈采血，將血漿離心（3000r/min15min）分離出血清并分裝于無菌EP管內(nèi)，標本暫凍存于-70℃冰箱，統(tǒng)一測FPG、FINS并計算HOMA-IR(HOMA-IR=FPG(mmol/L)×FINS(μIU/mL)/22.5）。于無菌條件下摘取大鼠相同的兩葉肝臟，其中一葉統(tǒng)一用10%中性甲醛固定做石蠟切片，后期經(jīng)蘇木精一伊紅（HE）染色

5、觀察肝組織病理形態(tài)學變化；另一葉用錫箔紙包裝標記并快速投放于液氮中，Western Blot法檢測肝臟中M1型巨噬細胞特異性標志物誘導型一氧化氮合酶（iducible nitric oxide synthase,iNOS）和M2型巨噬細胞特異性標志物精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)蛋白的表達水平。
　　結果：
　　1.與對照組相比，HSHF組大鼠FPG、FINS及HOMA-IR均明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P

6、＜0.05）；與HSHF組大鼠相比，替米沙坦組大鼠FPG、FINS及HOMA-IR均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2.與對照組相比，HSHF組大鼠肝組織HE染色結果均可見彌漫性的脂肪變性，細胞核位于邊緣，細胞多呈空泡狀，體積顯著增大，胞漿內(nèi)可見中、大泡性的脂滴沉積，氣球樣變多見，胞質(zhì)疏松，肝小葉和匯管區(qū)大量炎細胞浸潤，點狀壞死灶明顯；與HSHF組相比，替米沙坦組肝組織HE染色結果可見肝細胞體積減小，脂滴體積變小

7、，以小、中泡性的脂滴為主，氣球樣變及小葉內(nèi)炎癥均明顯改善。
　　3.與對照組相比，HSHF組大鼠肝臟iNOS蛋白表達水平顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與HSHF組大鼠相比，替米沙坦組大鼠iNOS蛋白表達水平顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　4.與對照組相比，HSHF組大鼠肝臟Arg-1蛋白表達水平顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)；與HSHF組大鼠相比，替米沙坦組大鼠Arg-1蛋白表達水