不同膳食模式對(duì)NAFLD大鼠血清短鏈脂肪酸及肝臟炎癥因子的影響.pdf

1、研究目的：
　　基于高脂肪飲食誘導(dǎo)的NAFLD大鼠模型，再分別給予四種膳食飲食包括普通飼料、高脂肪飼料、高碳水化合物飼料和高蛋白質(zhì)飼料，以分組研究。通過(guò)檢測(cè)不同膳食組大鼠血清短鏈脂肪酸（SCFA）和肝組織勻漿中促炎細(xì)胞因子 IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ水平及肝組織中腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信號(hào)通路的變化情況，從而探討膳食因素的改變對(duì)NAFLD發(fā)生發(fā)展的影響以及NAFLD發(fā)病相關(guān)機(jī)制。
　　研究方法：

2、r>　　將42只6周齡、體質(zhì)量在140-180g區(qū)間的雄性潔凈級(jí)SD大鼠，通過(guò)一周時(shí)間的適應(yīng)性喂養(yǎng)，隨機(jī)分成2個(gè)膳食組即對(duì)照組（12只）和模型組（30只），對(duì)照組采用普通飼料膳食飲食，模型組采用高脂肪飼料膳食飲食。8周后每組各隨機(jī)處死6只大鼠，并根據(jù)大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)和病理學(xué)結(jié)果及生化指標(biāo)確定NAFLD大鼠模型的建立情況。NAFLD大鼠模型成功建立以后，隨機(jī)將模型組更換為四種膳食飲食，每組各6只大鼠，即包括普通膳食組、高脂膳食組、高糖膳

3、食組和高蛋白膳食組，高脂膳食組繼續(xù)用含高脂肪的飼料喂養(yǎng)，其余各組更換膳食飲食，即高蛋白膳食組采用高蛋白質(zhì)飼料膳食飲食，高糖膳食組采用高碳水化合物飼料膳食飲食，普通膳食組采用普通飼料膳食飲食。于12周末處死大鼠。采用HE染色方法觀察大鼠鏡下肝組織結(jié)構(gòu)的改變；運(yùn)用生物化學(xué)的方法測(cè)量大鼠肝勻漿中低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、總膽固醇（TC）；運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測(cè)肝組

4、織勻漿白介素IL-6、IL-1β、IL-18、腫瘤壞死因子TNF-ɑ；氣相色譜法檢測(cè)血清短鏈脂肪酸（SCFA）；運(yùn)用免疫組織化學(xué)（IHC）法測(cè)定大鼠肝臟組織中腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPKα）原位表達(dá)程度；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real Time-PCR）法測(cè)定大鼠肝臟內(nèi)乙酰輔酶A羧化酶（ACC）和羥甲基戊二酸單酰CoA還原酶（HMGR）mRNA轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果：
　　1. NA

5、FLD大鼠模型建立結(jié)果
　　通過(guò)8周的高脂膳食，模型組大鼠的體質(zhì)量、濕肝重及肝指數(shù)較同期對(duì)照組明顯增加；模型組肝臟組織勻漿中TC、TG、LDL-C含量較同期對(duì)照組明顯升高，HDL-C明顯降低；大鼠肝組織的形態(tài)學(xué)及 HE染色光鏡下觀察結(jié)果均表明模型組大鼠的肝組織脂質(zhì)沉積增加；通過(guò)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示8周的高脂膳食能夠引起肝細(xì)胞的脂肪變性，即高脂肪膳食成功誘導(dǎo)建立NAFLD大鼠模型。
　　2.膳食因素干預(yù)結(jié)果
　　1）肝臟組織形

6、態(tài)學(xué)和病理學(xué)結(jié)果
　　通過(guò)觀察大鼠肝臟組織的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)發(fā)現(xiàn)對(duì)照組大鼠的肝臟組織為暗紅色，肝臟質(zhì)地柔軟肝緣銳利，無(wú)明顯異常改變；普通膳食組大鼠肝臟組織體積稍變大，顏色比正常肝臟暗淡，肝臟表面粗顆粒感，肝邊沿略變鈍，質(zhì)地尚柔軟；高脂膳食組、高蛋白膳食組和高糖膳食組大鼠肝臟體積明顯變大，呈現(xiàn)蒼白色，肝緣變鈍，表面能夠見到結(jié)節(jié)及灶狀改變。HE染色鏡下表現(xiàn)，對(duì)照組大鼠肝組織內(nèi)小葉結(jié)構(gòu)清楚分布整齊，胞質(zhì)均勻，中心可見胞核；普通膳食組仍可見肝組

7、織小葉結(jié)構(gòu)，部分肝組織細(xì)胞水腫，細(xì)胞內(nèi)能夠看到少量的脂滴空泡，呈輕癥脂肪變；高脂膳食組、高蛋白膳食組和高糖膳食組肝組織小葉分布不清，界線與結(jié)構(gòu)不清楚，胞質(zhì)疏散，肝索結(jié)構(gòu)混亂，肝臟細(xì)胞腫脹明顯，呈氣球樣改變，胞質(zhì)中出現(xiàn)大小不一的脂滴，表現(xiàn)為中-重癥脂肪變。
　　2）肝臟組織生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果
　　與對(duì)照組對(duì)比,高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組大鼠肝臟組織勻漿中 TG，TC，LDL-C含量增加，HDL-C降低，差異

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與普通膳食組相比較，高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組大鼠肝臟組織勻漿中TC，TG，LDL-C含量增加，HDL-C降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3）血清中SCFA水平
　　高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組與對(duì)照組比較，大鼠血清中總 SCFAs水平和乙酸鹽水平均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），丙酸鹽和丁酸鹽水平無(wú)明顯差異；高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食

9、組與普通膳食組比較，大鼠血清中總 SCFAs水平和乙酸鹽水平均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），丙酸鹽和丁酸鹽水平無(wú)明顯差異。
　　4）肝臟組織IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ濃度
　　與同期對(duì)照組對(duì)比,高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組肝組織勻漿IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與同期普通膳食組相比，高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組

10、肝組織勻漿IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　5）肝臟組織中AMPK-α2和p-AMPKα表達(dá)水平
　　高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組與同期對(duì)照組比較,大鼠肝臟組織中 AMPK-α2和 p-AMPKα表達(dá)水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組與同期普通膳食組比較，大鼠肝臟組織中 AMPK-α2和 p-AM

11、PKα表達(dá)水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　6）肝臟組織中ACC和HMGR mRNA轉(zhuǎn)錄水平
　　高脂膳食組、高糖膳食組、高蛋白膳食組和普通膳食組與對(duì)照組相比,大鼠肝臟組織勻漿中 ACC及 HMGR mRNA轉(zhuǎn)錄水平均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組與普通膳食組比較，大鼠肝臟組織勻漿中ACC及HMGR mRNA的轉(zhuǎn)錄水平均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。<

12、br>　　結(jié)論：
　　1.通過(guò)8周的高脂膳食可以誘導(dǎo)形成NAFLD大鼠模型，表明長(zhǎng)期的高脂膳食飲食能夠引起肝組織細(xì)胞脂質(zhì)沉積，誘發(fā)肝細(xì)胞的脂肪變性。
　　2.高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組大鼠血清中乙酸鹽水平和總 SCFAs水平均升高，而丙酸鹽和丁酸鹽水平無(wú)明顯差異；提示SCFA可能對(duì)NAFLD發(fā)病產(chǎn)生一定影響，其中乙酸鹽可能對(duì)NAFLD的病理進(jìn)展過(guò)程產(chǎn)生重要影響。
　　3.高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組大

13、鼠肝臟組織勻漿中促炎細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-ɑ含量明顯增加，表明炎性細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α促進(jìn)了NAFLD肝臟組織的慢性低度炎性反應(yīng)過(guò)程的發(fā)生發(fā)展。
　　4.高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組肝臟組織中AMPK-α2和p-AMPKα表達(dá)水平降低，而高脂膳食組、高糖膳食組和高蛋白膳食組肝組織勻漿中 ACC及HMGR mRNA的轉(zhuǎn)錄水平增高，提示AMPK活性及ACC和HMGR的